总糖和还原糖的测定:3,5－二硝基水杨酸法
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目的要求
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理
在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
一、 试剂
3,5－二硝基水杨酸（DNS） 试剂 ：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为2.0mg/mL。
6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500mL。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。
6mol/L NaOH：称取120g NaOH溶于500mL蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料
藕粉，淀粉。
三、器材
试管 1.5×15cm（×13）, 3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5）， 10mL（×1）；水浴锅；电炉；分光光度计。
操作方法
一、 葡萄糖标准曲线制作
取6支1. 5 cmm×1.5cm
试管
，按下表加入2.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。
|
管号 |
葡萄糖标准液（mL） |
蒸馏水(mL) |
葡萄糖含量(mg/mL) |
A540 |
|
0 |
0 |
1 |
0 |
|
|
1 |
0.2 |
0.8 |
0.4 |
|
|
2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
|
|
3 |
0.6 |
0.4 |
1.2 |
|
|
4 |
0.8 |
0.2 |
1.6 |
|
|
5 |
1 |
0 |
2 |
在上述试管中分别加入DNS试剂2.0mL，于沸 水浴 中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
