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单糖组成分析

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【实验原理】
多糖在浓硫酸中保温一定时间可完全水解为单糖,通过纸层析分离,特定 试剂 显色后与已知糖的标准混合物作对比,可以鉴定多糖水解产物中单糖的组成。

【实验材料】
1. 实验器材
水解管;滤纸;玻璃毛细管;层析缸;喷雾器。

2. 实验 试剂
⑴ 标准糖溶液: 称取一定量的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖,用 蒸馏 水溶解,得标准糖混合溶液(每种糖的点样量为20微克~30微克)。
⑵ 展层剂: 正丁醇:乙酸:水=4:l:5 (上层)。
⑶ 显色剂:苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液(邻苯二甲酸1.6g溶于水饱和的正丁醇100 ml,加苯胺0.93g(相当于0.9 ml)。
⑷ BaCO3;1mol/L硫酸。

【实验操作】
l.完全酸水解:
称取20 mg多糖样品,加入1mol/L H 2 SO 4 2ml;封管,l00℃水解8小时,然后加入BaCO 3 中和,定量 滤纸 过滤,滤液留作分析。

2.纸层析:
将层析 滤纸 剪成7cm×40cm的纸条,距层析滤纸一端2cm处画一横线作为点样线,在点样线上画两个点分别作为标准糖溶液和多糖水解液的点样位置。用玻璃毛细管点样,斑点尽可能小,而且每点一滴,待点样点干燥后,在同一位置再点第二滴。然后将滤纸条悬挂于层析缸中进行层析,展层时间约为36小时。

3.显色:
将滤纸取出,自然干燥,喷上苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液,100℃条件下15分钟即可显色。标准单糖混合物色斑在滤纸上由下而上的顺序是:半乳糖-葡萄糖-甘露糖-阿拉伯糖。与标准单糖混合物色斑比较,即可判断多糖样品的单糖组成
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