酶的性质实验—pH对酶活力的影响

【实验原理】
酶活力受环境pH的影响，在一定pH下，酶表现最大活力，高于或低于此pH，酶活力降低，通常把表现出酶最大活力的pH称为该酶的最适pH。pH影响酶活力的主要原因有以下几个方面，首先，pH影响酶分子活性部位上有关基团的解离，另外，也影响底物的解离状态，从而影响酶活性中心与底物的结合或催化。其次，有关基团解离状态的改变影响酶的空间构象，甚至会使酶变性。尽管有一些酶能忍受较大的pH的变化，但大多数酶保持活性的pH值范围很窄。正因如此，生物体使用缓冲液调节体内的适宜pH值。

【实验材料】
1. 实验器材
试管及试管架；漏斗及滤纸；恒温水浴锅；温度计；移液管
2. 实验 试剂
⑴ 1% 酪蛋白溶液：同酶的特异性实验
⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液：同酶的特异性实验
⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶的特异性实验
⑷ 0.1mol/L盐酸
⑸ 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液
⑹ 0.4 mol/L碳酸钠溶液
⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
⑻ 福林 试剂 : 同的酶特异性实验

【实验操作】
　　取三支 试管 , 按下表加入试剂：

试剂	试管 编号
1	2	3
1% 酪蛋白溶液(ml)	1.0	1.0	1.0
pH10 缓冲液(ml)	1.0	—	—
0.1M HCl(ml)	—	1.0	—
0.2M NaOH 溶液(ml)	—	—	1.0
1/2000碱性蛋白酶溶液(ml)	1.0	1.0	1.0
实验现象

混合均匀后，于40℃ 水浴 中保温15分钟。 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml，分别过滤，各吸取滤液1.0ml，加0.4M碳酸钠溶液5.0ml，福林试剂1.0ml，摇匀，于40℃ 水浴 保温15分钟，观察现象，比较在不同pH下，碱性 蛋白酶 活力的大小。