DNA的结构与理化特性
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DNA分子是双螺旋结构,特点是:①DNA是由两条多聚核苷酸链围绕同一中心轴盘绕成右手双螺旋结构;②两条多聚核苷酸链相互平行,方向相反,即一条链为5′端向3′端,另一条链为3′端向5′端,形成反向平行的双螺旋;③DNA多聚核苷酸链的主链是磷酸和脱氧核糖,位于双螺旋的外侧,碱基在内侧。两条多核苷酸链对应的碱基通过氢键连接,形成碱基对(base pair,简称bp)。碱基对的组成有一定的规律,A与T通过两对氢键配对,C与C通过三对氢键配对。一条链上某一碱基是A,则另一条链上与它配对的碱基必定是T。这种A~T、G~C的配对关系称为碱基互补配对原则或碱基互补。由于两条链之间严格的碱基互补关系,当一条核苷酸链的碱基序列确定以后,可推知另一条互补核苷酸链的碱基序列。碱基互补原则是DNA复制、转录和反转录的分子基础,也是所有DNA分析方法最基本的原理。
DNA具有变性、复性和分子杂交等理化特性。维持DNA双链结构的主要是氢键。DNA变性(denaturing)是指双链之间的氢键断裂,双螺旋结构解开,形成两条多核苷酸单链的过程。加热、过高或过低的pH、有机溶剂、二甲基亚石风、尿素、甲酰胺等 试剂 均可使DNA变性。温度升高引起的DNA变性叫热变性,过高pH引起的变性称为碱变性。DNA变性是可逆的,只要消除了变性条件,分开的两条互补链又可重新结合,恢复原来的双链结构,这一过程称为复性。加热后变性DNA在温度降低过程中的复性又称为退火。不同来源的DNA加热变性后,只要两条多 核苷酸 链的碱基有一定数量能彼此碱基互补配,就可以经退火而复性,形成由两条不同来源的DNA链组成的杂交双链。这种根据核酸分子变性及复性的性质,通过碱基配对使不同来源的两条多 核苷酸 链的相互结合称为核酸的分子杂交(hybridization)。DNA变性、复性和分子杂交是所有DNA分析方法的基础。