动物组织RNA提取及纯化

实验概要
提取样品组织中的RNA并消除DNA污染
实验原理
Trizol裂解细胞使RNA释放
beta巯基乙醇一直RNase活性
酚-氯仿抽提分离RNA
RNase-Free DNase消除DNA污染
主要 试剂
Trizol
无水乙醇
氯仿（三氯甲烷）
异丙醇
RQ1 RNase-Free DNase（Promega，M6101）
液氮
RNase-Free water
醋酸钠缓冲溶液（3M，pH5.2）
主要设备
离心机
研钵
热块
离心机
实验材料
组织样品
实验步骤
组织中total RNA的提取
取适量组织（约30mg）于研钵中加入液氮研磨，研碎后转移至EP管中；
向样品中加入1mL Trizol，吹匀，放置5min；
向上述EP管中加入200μL氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3min，4℃12000rpm离心15min；
取上层水相500μL于新的EP管中（注意不要吸入沉淀），加入100μL氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3min，4℃12000rpm离心15min；
取上层水相400μL于新的EP管中（注意不要吸入沉淀），加入400μL异丙醇，室温放置10min，4℃12000rpm离心10min；
弃上清，加入1mL 75%乙醇洗涤，轻弹混匀，4℃7500rpm离心5min；
20μL RNase-Free Water溶解RNA；
紫外测定RNA浓度，记录A260/280，， 琼脂 糖电泳鉴定RNA质量。
Total RNA中DNA的

DNA消化体系（100μL）
RNA样品：10mg（量不足可适量减少）
RQ1 DNase 1undefined Reaction Buffer：10μL
补水至100μL
如体系加好样品，37℃孵育30min；
向体系中加入100μl DEPC水；
加入100μl氯仿，震荡混匀，室温放置10min；
4℃13200rpm离心15min，吸取上层清夜150μl转移至新的EP管中；
加入0.1倍体积（15μl）NaAc Buffer及等体积（150μl）异丙醇，室温沉降30min；
4℃13200rpm离心15min，弃上清，75%乙醇洗涤沉淀；
4℃12000rpm离心5min，弃上清，开盖放置晾干乙醇；
20μl RNase-Free水溶解RNA；
紫外测量浓度及A260/280，1.5% 琼脂 糖电泳检测RNA状态。
注意事项
所用工具均经高温灭菌
EP管、枪头经DEPC处理
实验地点尽量选择空气流动较少，实验时带口罩等。