大肠杆菌中断杂交

一．实验目的
掌握通过物理手段中断细菌接合作用的方法，并且进行基因定位。
 
二． 实验原理。
在大肠杆菌细胞内，F因子可以插入到宿主细胞的染色体DNA中，带有一个整合F因子的细胞称为Hfr细胞。不同的Hfr菌株中F因子整合的位置都不尽相同。当Hfr细菌与F-接合时Hfr细胞的染色体可以进入F-细胞，发生重组。Hfr细菌中染色体的转移从F因子末端开始，而且在转移的过程中可随时发生中断。因此，接合后的F-细菌虽然接受了某些Hfr基因，但是一般不能接受F因子从而成为Hfr或F+状态。而由于染色体的转移具有方向性且随时中断，处在前端的Hfr基因有更多的机会出现在F-细菌中，越位于后端的基因转入F-细胞的机会就越少。因此，根据接合后F-细菌中Hfr基因出现的多少便可以知道这些基因转移的先后顺序，即基因在染色体上的排列顺序。 中断杂交便是依据这一原理设计的一种方法。和非中断杂交方法不同的是，中断杂交是运用机械的方法使Hfr和F-细胞的杂交在任何时间中断，这是一种以时间为单位的基因定位法，可以测得特定基因在染色体上排列的绝对位置。
根据文献记载，在标准实验条件及37oC环境中整个Hfr细胞染色体的转移需要100分钟，所以可以将大肠杆菌的染色体全长定为100min，而本实验讲采用实验室中的振荡器作为中断杂交装置。选用大肠杆菌Hfr染色体上4个距离较远的基因作标记进行中断杂交测定Hfr标记在Hfr标记在F-细菌中出现的先后顺序与时间，并将测定基因定位。

遗传学实验设计 生 52 程卓 2005012313 大肠杆菌中断杂交实验
 
三． 实验用具及材料。
1. 菌株。
供体菌：E.coli CSH60 Hfr str ^s
受体菌：E.coli 57B F- 缺陷型
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