DNA 的琼脂糖凝胶电泳

（一）实验目的
1、了解琼脂糖凝胶电泳的原理和使用范围。
2、了解琼脂糖凝胶电泳的操作技术。
（二）实验内容与基本要求
本实验用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，其主要内容包括制胶，加样，电泳，染色及拍照。
（三）主要 仪器 设备及器材
1、设备：电泳仪、水平式电泳槽、紫外线透射仪、凝胶成像系统。
2、器材：DNA 、琼脂糖、微量加样器、微量 离心管 、溴酚蓝。
（四）操作
1、琼脂糖凝胶的制备
以稀释的电泳缓冲液（0.5×TBE 溶液）为溶剂，用沸 水浴 或微波炉配制一定浓度的溶胶。将胶槽两端分别用透明胶紧密封住。将胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm 左右的间隙。待溶胶冷却至50℃左右时，加入最终浓度为0.5 微克/毫升的EB，摇匀，灌入水平胶框，插入梳子，自然冷却，撕去两端的透明胶，拨出梳子；将凝胶放入电泳槽内，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面刚高出琼脂糖凝胶面。
2、样品配制与加样
取2 μL RNA 样品，用电泳缓冲液稀释RNA 样品，加1/5 体积的6×溴酚蓝指示剂，混均后，点样，记录样品次序与点样量。
3、电泳
打开 电泳仪 的电源开关。最高电压不超过5V/cm，当琼脂糖浓度低于0.5%，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。琼脂糖凝胶分离大分子核酸实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。
4、观察和拍照
在紫外透射仪下观察DNA 条带，用拍照，或用 凝胶成像 系统输出照片。通过比较样品与一系列标准样品的荧光强度，可估算出待测样品的浓度。
5、注意事项与提示
1）溴化乙啶具有强烈的致癌作用，操作时应带手套，应避免污染实验高压台面。
2）溴化乙啶在紫外光源上放置时间过长，荧光将会猝灭。
3) 紫外线对人体有损害，对眼睛尤甚，操作时应注意有效防护。