实验所用培养基和试剂

互联网2013-06-05

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1、营养琼脂培养基

成分：

蛋白陈 10 g

牛肉育 3 g

氯化钠 5 g

琼脂 15-20 g

蒸馏水 1000 mL

制法：
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15 ％氢氧化钠溶液约2 mL校正pH至7.2-7.4，加入琼脂，加热煮沸使琼脂溶化，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min。

注:此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5 ％；如作成平板或斜面，则应2 ％。

2、乳糖胆盐发酵管

成分：

蛋白胨 10 g

猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5 g

乳糖 10 g

0.04 ％溴甲酚紫水溶液 24 mL

蒸馏水 1000 mL

pH7.4

制法：
将蛋白陈、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115 ℃高压灭菌15 min。

注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

3、乳糖发酵管

成分：

蛋白胨 20 g

乳糖 10 g

蒸馏水 1000 mL

0.04％溴甲酚紫水溶液 25 mL

pH7.4

制法：

将蛋白陈及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装每管30 mL、10 mL或3 mL，并放入一个小倒管，115 ℃高压灭菌15min。

注：
①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
②30 mL和l0 mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3 mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。

4、麦康凯琼脂

成分：

蛋白胨 17g

朊胨 3 g

猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5 g

氯化钠 5 g

琼脂 17 g

蒸馏水 1000 mL

乳糖 10 g

0.01 ％结晶紫水溶液 10 mL

0.5 %中性红水溶液 5 mL

制法：

①将蛋白胨、朊胨、胆盐和氧化钠溶解于400 mL蒸馏水中，校正PH7.2，将琼脂加入600 mL蒸馏水中，加热溶解，将两液合并，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min备用。

②临用时加热熔化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50 ℃一55 ℃时，加入结晶紫相中性红水溶液，摇匀后倾注平板。结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

5、伊红美蓝琼脂(EMB)

成分：

蛋白胨 10 g

乳糖 10 g

磷酸氢二钾 2 g

琼脂 17 g

2％伊红Y溶液 20 mL

0.65％美蓝溶液 10 mL

蒸馏水 1000 mL

pH 7.1

制法：

将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121 ℃高压灭菌15 min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50 ℃一55 ℃，加入伊红和美蓝溶液，格摇匀，倾注平扳。

6、三糖铁琼脂（TSI）

成分：

蛋白胨 20 g

牛肉膏 5 g

乳糖 10 g

蔗糖 10 g

葡萄糖 1 g

氯化钠 5 g

硫酸亚铁铵[Fe(NH₄)₂·(SO₄)₂·6H₂O] 0.2 g

硫代硫酸钠 0.2 g

琼脂 12 g

酚红 0.025 g

蒸馏水 1000 mL

pH7.4

制法：

将除琼脂和酌红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂，加入0.2 ％酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装于试管内，装量宜多些，以便得到较高的底层。l21 ℃高压灭菌15 min，放置高层斜面备用。

7、克氏双糖铁琼脂（KI）

上层培并基成分：

血消化汤(pH7.6) 500 mL

琼脂 6.5 g

硫代硫酸纳 0.1 g

硫酸亚铁铵 0.1 g

乳糖 5 g

0.3 ％酚红溶液 5 mL

下层培养基成分：

血消化汤(pH7.6) 500 mL

琼脂 2 g

葡萄糖 1 g

0.2％酚红镕液 5 mL

制法:

①取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别加入琼脂，加热溶解。

②分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养茬分装于灭菌12 mm×100 mm试管内，每管约2 mL。115 ℃高压灭菌10min。

③将上层培养基放在56 ℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内．使其凝固。

④待下层培养基凝固后，以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5mL，放成斜面。

8、半固体琼脂

成分：

蛋白胨 10 g

牛肉膏 3 g

氯化钠 5 g

琼脂 4 g

蒸馏水 1000 mL

pH7.5

制法：

按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH7.4-7.6加入琼脂后趁热过滤（若琼脂无杂质可不过滤），分装、包扎、标记，121 ℃灭菌15 min，取出直立凝固备用。

注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异等试验用。

9、Honda氏产毒肉汤

成分：

水解酪蛋白 20 g

酵母浸膏粉 10 g

氯化钠 2.5 g

磷酸氢二钠 15 g

葡萄糖 5 g

微量元素 0.5 g

蒸馏水 1000 mL

pH7.5

制法：

溶解后校正pH，121 ℃高压灭菌15 min，待冷却至45-50 ℃时，加入林可霉素溶液(每毫升培养基内含90 μg)。微量元素配方：硫酸镁5 g、氯化铁0.5 g、氯化钴2 g、蒸馏水100 mL。

10、E1ek氏培养基(毒素测定用)

成分：

蛋白胨 20 g

麦芽糖 3 g

乳糖 0.7 g

氯化钠 5 g

琼脂 15 g

40 ％氢氧化钠溶液 1.5 mL

蒸馏水 1000 mL

pH7.8

制法:

用500 mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分，煮沸，并用滤纸过滤，用1 moL/L氢氧化钠校正pH；用另外500 mL蒸馏水加热溶解琼脂，将两液混合，分装于试管内，每管10 mL或20 mL，121 ℃高压灭菌15 min。临用时加热溶化琼脂，倾注平板。

11、肠道菌增菌液肉汤

成分：
蛋白胨 10 g

牛胆盐 20 g

葡萄糖 5 g

磷酸氢二钠 8 g

磷酸二氢钾 2 g

煌绿 0.015 g

蒸馏水 1000 mL

pH7.2

制法：

将上述成分配好，加热溶解，校正pH，分装每瓶30 mL在115 ℃高压灭菌15 min。

12、营养肉汤

成分：

蛋白胨 10 g

牛肉膏 3 g

氯化钠 5 g

蒸馏水 1000 mL

pH7.4

制法：
按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225 mL，121 ℃高压灭菌15 min。

13、糖发酵管(乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇)

成分：

牛肉膏 5 g

蛋白胨 10 g

氯化钠 3 g

磷酸氢二钠 2 g

0.2 %溴麝香草酚蓝溶液 12 mL

蒸馏水 1000 mL

pH7.4

制法：
葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5 %加入葡萄糖，分装于有一个倒置的小试管内，121 ℃高压灭菌15 min。其他各种糖发酵管可按上述分配好后，分装每瓶100 mL，121 ℃高压灭菌15 min。另将各种糖类分别配好10 %溶液，同时高压灭菌。用无菌吸管将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装试管。

实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36±1 ℃培养。一般观察2-3天，迟缓反应观察14-30天。

14、尿素琼脂

成分：

蛋白胨 1 g

氯化钠 5 g

葡萄糖 1 g

磷酸二氢钾 2 g

琼脂 20 g

0.4 %酚红溶液 3 mL

20 %尿素溶液 100 mL

蒸馏水 900 mL

pH7.2±1

制法：
将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121 ℃高压灭菌15 min，冷至50-55 ℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2 %，最终pH应为7.2±1，分装于灭菌试管内，放斜面备用。

试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1 ℃培养24 h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色

15、氰化钾培养基

成分：

蛋白胨 10 g

氯化钠 5 g

磷酸二氢钾 0.225 g

磷酸氢二钠 5.64 g

琼脂 20 g

0.5 %氰化钾溶液 20 mL

蒸馏水 1000 mL

pH7.6

制法：

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌 15 分钟放在冰箱内使其充分冷却，每100 mL培养基加入0.5 % 氰化钾溶液2.0 mL（最后浓度为 1：1000）,分装于12 x100 mm 灭菌试管。每管约4mL, 立即用灭菌橡皮塞塞紧,放在4 ℃冰箱内, 至少可保存两个月。同时, 将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。

试验方法: 将琼脂培养物接种于蛋白陈水内成为稀释菌液,挑取一环接种于KCN培养基, 并另挑取一环接种于对照培养基。于36士1 ℃培养1-2天, 观察结果。如有细菌生长即为阳性(不抑制),经2天细菌不生长为阴性（抑制）。

〈注〉氰化钾是剧毒药物,使用时应小心, 以免中毒, 夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的原因主要是封口不严, 氰化钾还渐分解产生氢氨酸气体逸出,以致药物浓度降低细菌生长, 因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。

16、氧化酶试验

试剂:

1 % 盐酸二甲基对苯二胺溶液, 少量新鲜配制, 于冰箱内避光保存。

1 %α一萘酚酒精溶液。

试验方法 :

取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲苯对二胺溶液一滴。阴性者呈现粉红色, 并逐渐加深；再加α一萘酚溶液一滴。阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂, 直接滴加于菌落上, 其显色反应与以上相同。

17、靛基质试剂

柯凡克试剂：

将5 g对二甲氨苯甲醛溶解于 75 mL 戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸 25 mL。

欧-波试剂：

将1 g对二甲氨基苯甲醛溶解于95 %乙醇95 mL内。然后缓慢加入浓盐酸2O mL。

试验方法：

挑取小量培养物接种,在(36±1) ℃培养1-2 d, 必要时可培养4-5 d。加入柯凡克试剂约 0.5 mL, 轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 mL, 沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注:蛋白胨应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后 , 应先用已知菌种鉴定后方可使用。