样品浓缩技术

在免疫酶技术中，有时需要将样品液（如抗原、抗体、酶、酶标抗体或酶标抗原）浓缩。

常用的浓缩技术如下：

1.反透析法

如果在装有样品液的透析袋周围放上浓度很高的且具有吸水作用的多聚物或蔗糖，由于膜内渗透压比膜外低，膜内样品液中的蛋白质进行浓缩。常用的多聚物有聚乙烯吡咯酮（Polyvinylpyrrolidone,简称PVP，分子量约12000）、聚乙二醇（Polyethylene glycol,简称PEG,亦称Carbowax,分子量约6000，但PEG的分子量在5000－10000均可用），吸水剂不一定用干剂，可用30%的浓溶液，吸水更快。PEG浓溶液中常加入碱液以中和酸性。吸水剂用后可通过加温或吹风进行回收。PVP和PEG浓缩效果好，但是，小分子量聚合体易进入膜内，并且PVP对在280nm波长处的紫外光有吸收作用。由于蔗糖易进入膜内，因此，要求蔗糖必须高纯度，并且对下一步工作（例如免疫动物）无影响。蔗糖的优点是来源方便，但会因分子量小而影响浓缩效果。

2.凝胶吸水法

凝胶例如葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶是具有一定孔径的微孔和吸水性能的多聚物颗粒，在蛋白样品液中加入孔径较小的凝胶颗粒，能吸去样品中的水分，达到浓缩的目的。一般用Sephadex G25 或G50,浓缩效果好，吸附作用也小，经过离心去吸水凝胶即得蛋白浓缩液。

3.蒸发去水法

将样品液装在透析袋内，悬挂起来，在低温下用电扇吹风蒸发，或将样品液倒在平面搪瓷浅盆中，用电扇吹风蒸发，均可达到浓缩目的。此方法简便，但是所需时间较长，并会增高样品中的盐浓度。因此，在浓缩前或浓缩过程中应对挥发性缓冲液进行透析，然后再用蒸发去水法浓缩。

4.冰冻法

样品液在冰冻时，水分子结成冰，盐类及蛋白分子不进入冰内而留在液相中。操作时先将样品液冷却成固态，然后缓缓融解，利用溶剂与溶质融解点的差别而达到除去大部分溶剂的目的。例如，酶的浓缩，通过冰冻形成不含酶的纯冰结晶浮于液面，酶集中于下层溶液中，移去上层冰块，即得酶的浓缩液。

5.超滤浓缩法

在浓缩样品时，超滤法的作用也很大，它可以在3－4h内，将500ml很稀的样品液浓缩300倍以上，而不使蛋白变性，回收率高达90%以上。

超滤浓缩法是借助一种特殊的薄膜，对样品液中各种溶质分子进行选择性过滤的方法。当样品液在一定的压力通过特殊薄膜时，溶剂和小分子通过，大分子因受薄膜阻留而留在原样品液中，这是一项新兴的浓缩、去盐和生物大分子分离纯化的技术。