从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒

材料：

1. 缓冲液和溶液：氯仿；NaCl（固体）；聚乙二醇（PEG 8000）；SM

2. 酶和缓冲液：胰Dnase I (1mg/ml)；胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6）

3. 离心机和转子：Sorvall  GSA 转子或相当型号

4. 专用设备：量筒（2L）

5. 载体和菌株：大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解

方法：

用PEG沉淀噬菌体颗粒：

1、  将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温，加胰Dnase I和Dnase 至终浓度约为1µ g/ml，室温温育30min。

2、  每500ml培养物加入29.2固体NaCl（终浓度为1mon/L），搅拌使其溶解。将培养物冰浴1h。

3、  4℃，11000g（8300r/min于Sorvall GSA转子中）离心10min以去除细胞碎片，将四份培养物的上清混合置于2L的干净量筒中。

4、  测定所收集上清的总体积，然后转移至2L的烧瓶中，加固体PEG至终浓度为10%（m/V，加500ml上清加50gPEG），于室温用磁力搅拌器慢慢搅拌溶解PEG。

5、  将噬菌体/PEG溶液转移至聚丙烯离心管中，于冰水浴冷却，至少放置1h以便使噬菌体颗粒发生沉淀。

6、  4℃，11000g（8300r/min于Sorvall GSA转子中）离心10min以回收沉淀的噬菌体，去上清，将离心管倒过来倾斜放置5min，以便是剩余液体充分流干。用移液器吸取残余的液体。

用氯仿抽提细菌碎片：

7、  用一带橡皮球的宽口吸干将噬菌体沉淀轻轻地重悬于SM中（针对步骤3每500ml上清加8ml SM），将离心管倾斜放置，使SM完全覆盖并浸泡噬菌体沉淀，室温放置1h。

通过加入等体积的氯仿抽提噬菌体悬浮液中的PEG和细胞碎片，温和振荡30s。4℃，3000g（4300r/min于Sorvall GSA转子中）离心15min以分离有机相和亲水相，回收含噬菌体颗粒的亲水相。