颗粒性抗原的制备

颗粒性抗原主要指微 生物 、动物细胞。

（一）绵羊红细胞的制备

绵羊红细胞是制备溶血素的免疫原，制备时采健康绵羊的颈静脉血，立即注入无菌有玻璃珠的三角瓶内，经充分摇动15～20min，以去除纤维蛋白，获得抗凝绵羊全血。

另外，也可将全血和Alsever液以1：2混合，Alsever液既能起到抗凝作用又能起到保护作用。全血与Alsever液充分混合后，置4℃保存可使用3周左右。

免疫前取适量抗凝血于 离心管 中，用无菌生理盐水洗细胞2～3次（每次2000rpm，10min）。取压积红细胞，用无菌生理盐水稀释至2%～5%，即可用于免疫注射。

（二）菌体抗原的制备

O菌液的制备：选用经鉴定合格抗原性完整的标准菌株，接种于琼脂斜面培养基，置温箱37℃培养24h增菌；用适量生理盐水洗刮下菌苔，移入含有无菌玻璃珠的三角瓶中，充分摇动混匀菌体；100℃水浴2～2.5h杀菌并破坏H抗原。将处理过的菌液检测有无活菌存在，合格后用生理盐水稀释成每毫升8亿～10亿菌，加入石炭酸至终浓度为5%，即为O（菌体）抗原。

H菌液的制备：将合格的伤寒杆菌H菌株接种于普通琼脂的克氏瓶或大 试管 内37℃孵育18—24h。

肉眼观察有无杂菌生长，必要时作镜检。用无菌甲醛生理盐水洗下菌苔，将洗下液体装入无菌 试管 内，置37℃ 恒温箱 18—24h以杀菌。得到原液。用作无菌试验即将菌液接种于肉汤及 琼脂 培养基培养4天，无活菌生长者才可使用。

菌液的浓度可用麦克法伦特氏标准比浊法来测定，方法如下：

（1）分别配制1%硫酸溶液及1%氯化钡溶液。

（2）取口径相等质地相同的 试管 10支，依下表所示分别将硫酸及氯化钡溶液加入，封固管口，注明号码备用。

管号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
1%BaCl 2 (mL)	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5	0.6	0.7	0.8	0. 9	1.0
1%H 2 SO 4 (mL)	9.9	9.8	9.7	9.6	9.5	9.4	9.3	9.2	9.1	9.0
相当菌数（亿/mL）	3	6	9	12	15	18	21	24	27	30

（3） 将洗下的细菌原液放入与比浊管相同的 试管 中并予以一定稀释。与标准比浊管相比较，视其浊度相当于比浊管的第几管，然后将比浊管相当菌数乘以稀释倍数即可得到每毫升中所含细菌的数量。如细菌原液1：5稀释后其浊度与第3管相当，则原液每毫升含菌数为9ⅹ5=45亿。

（4） 菌液的稀释可按下列公式计算：

如原液5 mL，每毫升含菌45亿今欲稀释为每毫升含菌10亿的溶液应加生理盐水的毫升数：（5×45）/（10-5）=17.5 mL

即细菌原液5 mL加生理盐水17.5 mL稀释即成。

合格的原液用标准比浊管计算含菌落数目后，用生理盐水稀释至每毫升含菌10亿。是为了应用液加入适量甲醛使其为0.25%，制备好的原液及应用液均保存在2-10℃冰箱中备用，有效期为1年。