杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理
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杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理
1975年Koehler和Milstein创建了B淋巴细胞杂交瘤技术，该技术又称之为抗体的细胞工程技术。杂交瘤技术是一项周期长，高度连续性的实验技术，涉及大量组织细胞培养，细胞免疫学和免疫化学等方法。具体包括两种亲本细胞的选择和制备；细胞融合；杂交瘤细胞的选择性培养和克隆化，单克隆抗体的制备，特异性鉴定及纯化等。制备单克隆抗体的方法有经典的和改进的方法，本文仅介绍经典的方法。制备流程见图
骨髓瘤细胞培养
抗原的制备 及其悬液的制备
↓ │
免疫动物 ── 脾细胞的收集──┤ 细胞融合
↓ 及其悬液制备 ↓
加强免疫 混合,PEG融合
↓
分装于培养板孔中----接种于饲养细胞孔中,HAT选择培养 选择培养
37℃,5％CO2 过夜 ↓
↑
小鼠腹腔巨噬细胞的制备 筛 选 ───┐
↓ │
阳性细胞冻存 ←─ 阳性孔细胞克隆、培养与克隆的筛选 │ 克隆与再克隆
↓ │
冻存 ←─── 阳性克隆的培养与再克隆───
↓
冻存 ←─ 获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株 建株
↓
│ McAb的制备(杂交瘤培养上清或诱生腹水) 制备
↓ ↓
杂交瘤细胞稳定性检查 McAb的纯化及其全面鉴定 鉴定
细胞融合技术制备McAb的主要流程
借助物理或化学手段，将2个或2个以上不同特性的细胞融合在一起，组成一个异型核细胞，新形成的异型核细胞称为杂交细胞。如果2个细胞中有一个为瘤细胞，则融合的细胞称为杂交瘤细胞，此项技术称为杂交瘤技术。杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的基因和特性。
由免疫B细胞─浆细胞、瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞系可产生单一、特异性、纯化的抗体。该融合的细胞是经过反复克隆而挑选出来的，由该克隆细胞所产生的抗体称之为单克隆抗体(McAb)。McAb在分子结构、氨基酸序列以及特异性等方面都是一致的。
利用杂交瘤技术制备McAb的基本原理是根据以下三个原则：
①淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说，即一种克隆只产生一种抗体；
②细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性；
③利用代谢缺陷补救机理筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养增殖，制备所需的McAb。
