快速裂解酵母细胞制备样本（蛋白质的电泳分离）
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快速裂解酵母细胞制备样本（蛋白质的电泳分离）
使用这种方法会使蛋白质变性，在所用抗体能识别变性靶蛋白时才能使用这一方法。
【试剂与设备】
（1）待检测的酵母菌
（2）25%三氯乙酸（TCA）
（3）1%SDS
（4）丙酮
（5）RIPA缓冲液：
50mmol/L Tris•HCl (PH7.5)
150mmol/L NaCl
1% Nonidet P-40 (NP-40)
0.5% 去氧胆酸钠
0.1% SDS
（6）玻璃珠（直径0.45～0.50mm）
（7）台式离心机
（8）水浴箱
（9）涡漩振荡器
（10）加样器与吸头等
【操作步骤】
（1）0℃以12 000g离心1min，从1ml培养物中收集细胞，废弃上清液（当靶细胞为分泌型蛋白时除外）；
（2）用0.5ml 25%三氯乙酸（TCA）重悬细胞；
（3）按步骤1离心回收细胞，重悬于1ml 90%丙酮中；
（4）按步骤（1）离心，估算沉淀物体积，加入等体积1%SDS重新悬浮沉淀物；
（5）加入经酸处理的玻璃珠（直径0.45～0.50mm）至溶液的弯月面处；
（6）振荡悬液5次，每次间歇期间将悬液置于冰浴中冷却1min，在相差显微镜下监测细胞裂解情况；
（7）用一烧红的皮下注射器针头（23号）在微量离心管的顶盖上穿一小洞，以防加热过程中玻璃球冲出离心管；
（8）在沸水浴中加热3min；
（9）把玻璃珠转移到另一个微量离心管中，用0.5ml RIPA缓冲液洗涤原离心管，并把洗液合并于内装玻璃的管中；
（10）在微量离心管底部打一小洞，回收细胞提取液，这一操作使用烧红的皮下注射器针头效果最佳。把仍装载玻璃球的微量离心管置于另一空微量离心管上，把如此重叠的一对微量离心管，于4℃以2000g离心2min；
（11）回收下面一只内有细胞提取液的微量离心管，于4℃以2000g离心5min，使提取液澄清，移出上清液置于另一个微量离心管中，-20℃贮存备用。
【注意事项】
酵母细胞提取液储存于-20℃一般是稳定的，但是，如果待测蛋白被水解，则应在提取液中加入蛋白酶抑制剂，并保存于0℃。
