T、B淋巴细胞功能测定

互联网2010-12-02

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T 、B淋巴细胞功能测定

淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。体内主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的反应；体外试验方法包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原的增殖试验、细胞毒试验以及其分泌产物功能的测定（淋巴因子的测定见第八章）。淋巴细胞功能测定不仅能够了解机体免疫功能状态，而且是免疫缺陷病诊断的主要依据，也有助于探讨某些疾病的发病机理、疗效判断、推断转归。

一、T、B淋巴细胞增殖反应

测定淋巴细胞体外增殖反应是检测细胞免疫功能的常用方法。刺激淋巴细胞增殖的物质可分为二大类：①非特异性刺激物：如植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）、刀豆蛋白A（concanavalin A，ConA）、美洲商陆（pokeweed mitogen，PWM）、佛波酯（PMA）等有丝分裂原；能产生A蛋白的葡萄球菌（SAC）、EB病毒、链球菌溶血毒素S、细菌脂多糖（LPS）等微生物及其代谢产物；胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白物质；抗CD3、CD2、IgM等细胞表面标志的抗体以及某些淋巴因子等；②特异性刺激物：主要是特异性抗原物质，包括各种可溶性抗原和细胞表面抗原。不同的刺激因子可刺激不同的淋巴细胞分化增殖，因而可反映不同淋巴细胞群体的免疫功能。体外测定淋巴细胞增殖反应常采用同位素掺入法和MTT比色法。

二、混合淋巴细胞培养

混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction，MLR）是来源于两个个体的淋巴细胞在体外混合培养时，由于细胞表面HLA-Ⅱ类抗原型别不同，可相互刺激对方淋巴细胞转化（称为双向MLC），并产生多种淋巴因子，促进NK、CTL、LAK等杀伤细胞活性。若将刺激的一方淋巴细胞先用丝裂霉素C（mitomycine C）或放射线照射处理，使该细胞失去增殖能力，但仍保持刺激对方淋巴细胞增殖的试验称为单向MLC。MLC反应可通过³ H-TdR掺入法或MTT法等方法检测。

MLC主要用于移植前组织配型，以测定供、受者间组织相容性抗原的相容程度。也是免疫调节研究中的实验模型。

三、细胞毒性T细胞胞毒功能测定

细胞毒性T细胞（CTL）是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一，它可通过与靶细胞的直接接触，特异而高效地杀伤靶细胞。其主要生物学作用为参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫和移植排斥反应。

四、B细胞功能的测定

B细胞在抗原或多克隆刺激剂丝裂原的诱导下分化为浆细胞，产生抗体。因此，实验室多采用检测多克隆抗体的产生来测定B细胞产生和分泌抗体的能力。

测定多克隆抗体产生的方法主要有细胞浆（内）Ig的检测和细胞外分泌抗体的检测，包括反向空斑形成法、酶联免疫斑点法及ELISA等。其中ELISA法是一种简便、特异、敏感的非放射性试验方法，广泛用于血清组织标本及细胞培养上清液中Ig含量的检测。

五、LAK/TIL细胞的活性测定

淋巴因子激活的细胞毒性细胞（lymphokine activated killer，LAK）和肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）在机体的免疫防御中起着十分重要的作用，特别是在肿瘤免疫过继疗法中具有重要的应用前景，其活性的检测对于评价机体的免疫状态具有重要的意义。