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红细胞的SPA-酵母菌混合花环试验

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1967
红细胞的SPA-酵母菌混合花环试验
 
【基本原理】
    葡萄球菌A蛋白(SPA)能与红细胞膜上粘附的IC中IgGFc段相结合,而补体致敏的酵母菌能与红细胞膜上未粘附IC的C3b受体相结合,各自形成花环。
 
【试剂及材料】
(1)         金黄色葡萄球菌:一般选用金黄色葡萄球菌的国际标准株CowanⅠ(ATCC 12598或NCTC8530),用不含SPA的Wood 46株作为阴性对照。目前已有冻干的SPA菌体制剂出售。
(2)         补体致敏的酵母菌试剂:制备方法同上。
 
【操作方法】
(1)         在试管内加入洗过3次的待测红细胞悬液50ul和补体致敏酵母菌悬液50ul,混合,放37℃水浴30min;
(2)         加50ulSPA菌体悬液(6.25×108 ml)混匀,37℃水浴30min;
(3)         取出水平涂片、瑞氏染色、油镜观察。
 
【结果分析】
    涂片染色后RBC为红色,酵母菌为蓝色,SPA菌体为浅蓝色。RBC上粘附2个以上酵母菌为RBC-C3b受体花环(酵母菌花环);粘附10个以上 SPA菌体为RBC-IC花环(SPA花环);同时粘附10个SPA菌体和2个酵母菌以上者为混合花环;未粘附SPA菌体与酵母菌者为裸红细胞。计数200个RBC,算出各自花环率。
 
【意义】
    该试验可同时显示4种免疫功能状态不同的红细胞,SPA菌体花环为已全部被IC或抗RBC抗体粘附的红细胞;酵母菌花环为未粘附IC或抗RBC 抗体的红细胞;混合花环为部分粘附IC或少许抗RBC抗体,并且C3b受体有空位的红细胞;裸红细胞为未粘附IC或抗体,并且C3b活性低(不能粘附补体致敏酵母菌)的红细胞。
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