混合型玫瑰花环试验
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原理
混合型玫瑰花环的方法是既应用补体致敏的家鸽红细胞(PRBC)作为B—细胞的标志,同时又应用绵羊红细胞(SRBC)作为T—细胞的标志,在一张玻片上同时检测T、B淋巴细胞。
操作方法
1.鸽翼下静脉采血,加等量阿氏液,保存于4℃,可用2周。
2.以Hank’s液洗鸽红细胞3次,最后配成5%PRBC悬液。
3.取5%PRBC0.25ml,加溶血素(兔抗鸽红细胞抗体,亚凝集单位)0.25ml于37℃水浴30min。以Hank’s液洗涤3次,去上清,加Hank’s液0.25ml。
4.加1%SRBC悬液0.25ml,37℃水浴30min,Hank’s液洗涤3次,去上清,加Hank’s液0.25ml。
5.加淋巴细胞悬液0.25ml(2×106~4×106个细胞/ml),37℃水浴5min,500r/min离心3min,置4℃过夜。
6.取出迅速加入20%甲醛溶液0.5ml,混匀,于4℃放置10min后,加2滴2%美兰液,轻轻摇匀。
7.取1滴于载玻片,加盖玻片,置镜下观察。计数300个淋巴细胞。
结果判定
一个淋巴细胞吸附有3个以上的PRBC为PRBC玫瑰花细胞,即为B细胞。
一个淋巴细胞周围吸附有3个以上SRBC为SRBC玫瑰花细胞,即为T细胞。
一个淋巴细胞周围附有2个以上PRBC和3个以上SRBC为双相玫瑰花细胞,即为D淋巴细胞。
既无PRBC又无SRBC附着的淋巴细胞为N淋巴细胞,即为无标记淋巴细胞。
D淋巴细胞与N淋巴细胞是极少数的。
计数300个淋巴细胞,分别计数PRBC、SRBC玫瑰花细胞和双相玫瑰花细胞的形成率。