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基于凋亡诱导蛋白酶变化的细胞凋亡检测

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基于凋亡诱导蛋白酶变化的细胞凋亡检测
 
    半胱-天冬氨酸蛋白酶家族(cysteinyl  aspartate specific protease,Caspase)是近几年人们发现的与ced-3同源的一类蛋白酶,具有10余种成员。“C”代表半胱氨酸在酶的活性中心,“aspase”代表其底物切割蛋白作用位点都在天冬氨酸羧基端,这是caspase家族最为独特的催化活性。Caspase一般以非活化的酶原形式广泛存在于大多数细胞中,研究认为,一些caspase家族成员可在凋亡中被活化,继而活化其他的caspase,产生放大级联反应并切割底物,从而介导凋亡的极早期发生过程。例如caspase家族成员之一caspase 3在某些特定效应分子(尤其是TNF和Fas)诱导的细胞凋亡中是必不可少的。
 
    由于caspases家族可能是启动生化过程从而导致凋亡的最为重要的效应分子之一,因此对caspase活化的分析较其他常用的方法更能检测出凋亡的早期发生。Caspase可以切割多种重要底物, PARP是其中之一。PARP的裂解是细胞凋亡发生最有价值的标志,可以通过Western blot 来检测caspase对底物PARP的酶解。必须指出,Western blot方法虽具有说服力,但仍不能对caspase进行特异和定量的分析。原因在于大多数caspase的底物并不只由一种特异的caspase裂解,而是作用程度不同而已。以下介绍的酶联免疫吸附法可以高度特异地检测caspase 3的活性。
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