ABC法检测Thy-1肾炎过程中肾小球内TFPI-1的表达
互联网
1599
亲和免疫组织化学 ABC 法检测 Thy-1 肾炎过程中肾小球内 TFPI-1 的表达
TFPI-1是体内主要的生理性抗凝物质，除具有抗凝作用外，还有抗炎、抗血管生成、 抗增殖及诱导细胞 凋亡等多种功能。研究证明，系膜细胞能分泌TFPI-1。为研究TFPI- 1是否对肾小球肾炎具有一定的疗效，首先应用亲和免疫组织化学ABC法观察了在大鼠Thy-1肾炎过程中TFPI-1的表达情况。
1．方法
(1)石蜡切片常规脱蜡至水：二甲苯1 3～5min(冬天可延长至5-10min)一二甲苯Ⅱ 3～5min---100％乙醇l一2min---~95％乙醇11～2min一95％乙醇Ⅱ1-2rain一80％乙醇 1min一70％乙醇1min---自来水洗片刻一蒸馏水洗片刻。
(2)去除组织内源性过氧化物酶活性：切片浸人1．5％H2 O2 -甲醇溶液，37C，301Tlln。
(3)切片水洗：蒸馏水洗7～8次。
(4)抗原修复(胰蛋白酶修复)：0．1％胰酶消化液(100 mg胰酶+100 mgCaCl2 溶于100mlTBS中)预热30min，切片人预热的0．1％胰蛋白酶消化液，37C，30min。
(5)切片经蒸馏水洗，再用PBS洗5minX 3次。
(6)擦去组织周围PBS，滴加1：20正常马血清，置切片于湿盒内，37℃，20rain。
(7)倾去正常马血清，滴加小鼠抗TFPI-1单克隆抗体1：50，37~C，lh，移至4~C冰箱过夜。
(8)切片用PBS洗5rainX 3次。
(9)滴加生物素化马抗小鼠IgG，37℃，1h。
(10)切片用PBS洗5minX 3次。
(11)滴加ABC试剂，37~C，45min。
(12)切片用PBS洗5minX 3次。
(13)滴加DAB显色液，显色时间为5～10rain(显微镜下控制显色程度)。
(14)切片经蒸馏水洗，人0．1％甲基绿复染细胞核。
(15)切片脱水、透明、封固、镜下观察。
2．结果
免疫组织化学检测结果证实，在大鼠Thy1肾炎第14天THPI-1开始表达，并随着肾炎病程的延长而表达增加。
ABC法检测大鼠Thy-1肾炎过程中TFPI-1表达
