噬菌体肽库技术的原理

噬菌体肽库技术的原理

 

    噬菌体 肽库技术实际上是通过噬菌体展示技术将一定长度的所有外源多肽展示于噬菌体载体表面，实现基因表达产物与亲和筛选相结合的一种技术。以噬菌体为载体，把一段特定长度、随机合成的基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质(如pⅢ和pⅧ)N端的编码基因中，使这段基因编码的相应外源多肽在噬菌体外壳蛋白的N端以融合蛋白的方式表达并展示于噬菌体颗粒的表面，而且这种插入的外源多肽不影响和于扰噬菌体的生活周期，同时能够保持其天然构象，可以被相应的抗体或受体等靶分子所识别。同时，由于这段特定长度的基因是随机合成的，从理论上讲这段基因所编码的相应多肽应该包含自然界中这个长度肽的所有序列，这样就构成了一个特定长度的多肽库，而且库容量极大。进而可以利用靶分子，通过适当的亲和富集即生物淘选(biopanning)方法即“亲和吸附一洗脱一回收一扩增”多轮亲和筛选富集过程，洗去未吸附的或非特异结合的噬菌体，就可以从这个肽库中筛选到与靶分子特异性结合、表达有目的肽的噬菌体，经过感染大肠杆菌后可以大量扩增。另外，外源多肽展示在噬菌体的表面，但其编码基因位于病毒单链基因中，可通过对噬菌体的DNA测序推导出来，因此这种方式将多肽的表型与基因型密切联系在一起，实现了表型和基因型的转换。  

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