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尘螨重组变应原的应用

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尘螨重组变应原的应用
 
    1.特异性诊断技术的应用
    (1)重组变应原的诊断学:除了1类变应原外,其他绝大多数的尘螨重组变应原均表现出与IgE强反应性。经血清学试验及皮内试验检测表明,重组1类变应原弱于2类,而重组5、7类变应原呈强反应性;实验还证实了以3-4种重组抗原拼接的多价抗原效果优于单一者。皮试是有效、常见的检测方法之一。重组抗原、多价重组抗原作为诊断试剂的优点:易于标准化,其比例可以精确和限定。
    (2)嵌合抗体:Chapman MD与Amsterdam大学联合研制出用鼠抗Der p2单克隆抗体(Fab’)段与人源化重组IgE、IgGl和IgG4Fc段结合的嵌合抗体,后者既可以作为人类特异性变应原的探针,又能用于抗体反应的定性、定量测定。如抗Der p2嵌合IgE可用于IgE定量试验,通过绘制与IgE反应及抗Derp21gE反应的标准曲线,可计算出IgE的含量(ELISA)。该项实验适用于流行病学及免疫遗传学等领域研究,以及IgE对特异性变应原的反应及诊断学,变应原特异性嵌合抗体检测同型抗体的生物学功能也视为有价值的诊断工具。
(3)快速诊断对变应原的分析:分子技术的发展有利于改良对环境变应原检测的手段,譬如室内变应原分析的“黄金标准”,即通过单克隆抗体结合ELISA测定空气样本以及保存的室内尘埃样本,在绘制标准曲线、求得标准值以及经系统分析后所制订的指标。快速测试系统适用于对医院、诊所、医生办公室、药房以及居室等环境中变应原的检测,这对减少病人与变应原的接触有重要意义。在近几年里,发展了快速半定量显色测定法、斑点-ELISA等技术,前者以特异性抗体与硝酸纤维膜上的抗原起反应,后者能在3-4h检测多种屋尘变应原。浸棒条检测更具方便、简捷的特征,10min就有检测结果。此外,还有胶体金试验等。这些技术的发展均有利于环境的检测工作,而检测工作又促使设计出更好的避免接触变应原的装置。
 
    2.重组变应原与免疫治疗
    (1)变应原重新设计与选择:cDNA克隆重组变应原及氨基酸序列的研究对于发展新型变应原特异性治疗有促进作用。显然,多价重组变应原完全能代替传统免疫治疗所用的变应原提取物,通过对螨类、猫或花粉等变应原的修饰及临床使用,已取得了令人满意的效果。重组变应原优点在于能维持疗效的一致性、减少不良反应,但即使非常精制的变应原(IgE反应的变应原)也存在同天然变应原(提取物)相似的不良反应。为了解决这个问题,必须解决新型免疫疗法的设计,选择那些能降低过敏反应调节、使变应原特异性T细胞失活,或者能改变T细胞类型如使Th2细胞转变为Thl细胞免疫反应类型的变应原及相应的表位。目前的研究大多集中于Der p1、Der p2多肽T细胞的表位上。业已证明,某些Derpl主导表位有降低抗体应答的调节反应,还可避免以天然变应原诱导的哮喘发生(动物吸人试验)。单一多肽是否能消除T细胞对天然变应原的应答还不很清楚,但有报道经定点诱变产生完整的重组变应原,可以减少与IgE的结合。分子修饰也可达到这个效果,例如Der p2第21、73位的半胱氨酸被其他氨基酸替代,能减少IgE介导皮内试验反应的100倍,因为半胱氨酸可以维持T细胞的反应性。也可进行对重组变应原特异性位点的诱变,使其既保持T细胞的表位的完整性,又不能和IgE结合。
    作为免疫制剂来说,经修饰、纯化的重组表位肯定优于过去常用的多种变应原提取液及混合物。迄今为止,免疫治疗中存在一个主要的问题仍然未被认识,即婴幼儿早期治疗是否在预防IgE应答的过敏性疾病更具效果。幼儿早期暴露于变应原的重要性以及出生4周的新生儿时期的Th2细胞效应还未发育完善,接触天然变应原后是否可诱导出特异性的Thl细胞效应?研究证明,早期预防和干预对防止以IgE免疫效应过程是有效果的。众所周知,过敏体质的双亲,其孩子过敏性疾病的发病率很高,具有明显的遗传倾向,像这类孩子可以作为早期干预的对象,结合免疫治疗的同时,尽量避免接触变应原。
    (2)佐剂与载体效应:以变应原蛋白交联能诱导Thl细胞效应佐剂的构思巧妙,因为该交联物能诱导B细胞只产生IgG而非IgE,结果导向无病理变化的免疫效应过程,该疫苗对于哮喘的预防十分有益。这类佐剂包括几-12等。实验证明,经卵白蛋白交联IL-12免疫小鼠后,可以抑制IgE的产生;质粒或裸DNA疫苗也可诱导Thl细胞反应。令人惊奇的是p半乳糖苷酶结合人CMV载体免疫小鼠也可诱导产生IgG2。,而非IgE,甚至可抑制IgE的再次反应,故该系统克隆的重组蛋白(Der p5)可降低支气管组胺的水平,抑制IgE效应以及气道高反应性。裸DNA疫苗通过呈递HLA-I类分子以及诱导产生IL-12,使之介导Thl细胞的效应途径。
    迄今,人们开始尝试治疗气道高反应性的方法以及选择的疫苗有:变应原特异性免疫治疗、重组变应原免疫治疗、DNA免疫治疗、多肽免疫治疗、多价特异性变应原的免疫治疗、T细胞表位疗法(T-cell epitope-based therapy)以及TCR多肽的干预等。
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