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尘螨变应原的制备

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尘螨变应原的制备
 
    1)变应原 溶液制备的基本步骤:材料的粉碎和净化;去除材料中的脂肪和有害物质;有效成分的提取与溶液中分离与去除杂质;溶液的透析与浓缩;溶液的酸碱度的校正;溶液的灭菌及检测;溶液的急性毒性试验;溶液的标准化方法以及温度的控制和有效期的制定。
    以上的步骤一般可适用于所有的变应原溶液的制备,但针对不同的材料还须做一些调整,如不含脂肪的材料则不需去脂,某些制剂需要透析和浓缩等。
    2)尘螨的收集与培养:在我国,粉尘螨繁殖的高峰期为5~6月和9~10月,在此期间可以从面粉厂、粮店、食品厂以及磨坊等处的地面或米袋采集下脚粉尘。收集的粉尘先经2号筛去除大的杂质,再以4号筛除去较细的颗粒,最后倒人平皿,解剖镜下观测并用接种针或毛笔将螨接种于新鲜的面粉和大米上,在保持一定的湿度下常温培养。几周后观测螨的培养效果,并连同饲料再移人新的培养基中继续培养,反复数次可得大量的纯螨。
    3)我国最常见的致敏螨种的形态特征
    (1)户尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus):雄虫大小(240~280)um×(155―220)um,后盾板长大于宽。足I与Ⅱ等粗,基节内不突出,无胸骨。雌虫大小为(290~380)um×(220~260)um,形体较扁,后背中央皮纹纵行,足Ⅳ短小,足Ⅲ粗长。
雌、雄性户尘螨
    (2)粉尘螨(Dermatophagoides/oinae):雄虫大小(285~860)/1m×(200~245)um,后盾板宽短,足I特别粗短,基节I内突相接,有胸骨。雌虫大小(370~440)um×(235―220)um,体形饱满,后背中央皮纹横形,末端拱形,足Ⅳ等粗、细长。
雌、雄性粉尘螨
    4)材料的去脂肪和有害物质
    (1)去脂肪常用的有机溶剂:乙醚、丙酮、甲苯、二甲苯、苯、无水乙醇等。乙醚的优点是去脂效果好、挥发快,常被首选。其余溶剂安全系数较前者高,但缺点是挥发慢、去脂周期长。
    (2)去脂方法:将粉尘螨体浸于有机溶剂中,室温下搅拌,待有机溶剂挥发后,重复2次。
    5)有效成分的提取:将去脂的粉尘螨按重量比容积1;50(W/V)加入灭菌生理盐水于4℃下过滤灭菌,提取72h,每天振荡或搅拌4h。双层滤纸滤去虫体及杂质,溶液再经蔡氏过滤器(Seitzfilter)无菌过滤,校正pH值为7.0,4℃下保存备用。
    6)尘螨性变应原溶液的标准化:螨的重量与提取液之比为l:50。
    (1)总氮单位:变应原溶液含氮量与效价是成正比的,一般用凯氏定氮法检测最为标准。目前螨性疫苗注射液有两种规格,即12ug/ml(1:5 000)和6ug/ml(1:10 000)。
    (2)蛋白氮单位:由于变应原中的有效成分主要是蛋白质,故测定其含量是表达其效价的方法之一。目前常用的方法是先把溶液的非蛋白氮除去(如磷钨酸沉淀),然后用微量凯氏定氮法测定其蛋白氮含量。尘螨溶液的标准不得低于20 000蛋白氮单位/毫升(PNU/m1)。
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