基因组DNA探针与cDNA探针

基因组 DNA 探针与 cDNA 探针

 

    所谓探针，是一种已知的特异性分子，一种仅与特异的靶分子反应的分子。它可结合适宜的标记物．以便在与靶分子反应后被检测。核酸探针是指带有标记物的已知碱基序列的核酸片段，它仅与靶核酸即待测核酸反应。在原位杂交中，核酸探针是用于组织细胞内特定核酸序列定位的关键试剂。

 

    根据核酸性质的不同．核酸探针可分为基因组DNA探针、cDNA探针、cRNA探针、寡核苷酸 探针等几类。根据目的要求不同，可以选用不同的核酸探针。探针选择的最基本原则是应具有高度特异性。兼而考虑来源是否方便等其他因素。

 

    基因组DNA探针

 

    克隆化的各种基因片段是使用最广泛的核酸探针。几乎所有的基因片段都可克隆到质粒或噬菌体载体中，为获得大量高纯度的DNA探针提供了方便的来源。PCR技术也为DNA探针的获得提供了另一方便的来源。选择此类探针时，要尽可能使用基因的外显子。基因组DNA探针通常为双链，在使用时须进行变性处理。

 

    cDNA探针

 

    cDNA是互补于mRNA的DNA分子，可从cDNA文库中克隆获得。由于cDNA中不  存在内含子，因此是一种较为理想的探针。

 

    在对cDNA进行克隆时，可通过选择不同的载体来控制所产生的cDNA是双链还是单  链。如果以质粒作载体，则产生双链cDNA，获得的探针也是双链。由于双链cDNA有意义链和无意义链之间的复性会使能与靶mRNA结合的有效探针明显减少，而细胞内mRNA的拷贝量较少，故双链cDNA探针的检测灵敏度较低，较少用来做探测细胞内mRNA的原位杂交反应。如果将cDNA导人M13衍生载体中，则可产生大量的单链cDNA。用这种单链cDNA作探针既不需要变性，也克服了双链cDNA探针在杂交反应中两条链间复性的缺点，使能与靶mRNA结合的探针浓度提高，从而提高杂交反应敏感性。

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