细胞受体结合免疫测定CIC法

细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术，这类方法有灵敏度较高，特异性较强等优点，但需进行活细胞培养或细胞分离，影响因素多，重复性较差，目前仅适用于实验研究。此类技术有多种方法。

Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤患者分离建株的B淋巴细胞系。可在体外连续传代培养，细胞表面没有膜免疫球蛋白，Pc受体的亲和力很低，但有C3、C3b和C3d受体及Clq受体，而且不易脱落。因此能使结合补体的IC吸附在细胞上，然后再于反应系统中加入荧光素或i125标记的抗人IgG抗体，使其与结合在Raji细胞上的IC中的IRC反应，计算Rail细胞上结合的IC中渗入的核素量，即可判定IC的存在与含量。

1、试剂

（1）Raji细胞悬液 将Raji细胞培养在含20%小牛血清的RPMI-1640培养液中2-3d后即可收集应用，该细胞培养时不贴壁、不结团，生长容易（一般3d即可传一代），培养条件不苛求。但pH值应在6.5左右，超过pH7.0则生长不良。收集细胞时要计数和检查活细胞，台盼蓝排除试验要求活细胞在95%以上。

（2）核素标记抗IgC抗体 将兔抗人IgC血清经DE52分离兔IsC，用PBS稀释成蛋白质1mg/mL，按每ug蛋白质结合0.3uCi125I标记抗人IgC抗体。

2、操作步骤

（1）取培养72h的Raji细胞1800r/rain离心10rain，弃去上清液，细胞沉淀中加入不含小牛血清的1640培养液，洗2次；

（2）计数Raji细胞数，用完全1640培养液配成107/mL细胞悬液；

（3）取1滴细胞悬液加等量0.1%台盼蓝，放37℃10rain，镜检着色细胞不应超过5%；

（4）在试管中加入细胞悬液501~L，再加入1：4稀释的受检血清25uL；

（5）摇匀后放37℃45rain，每5-10rain轻摇一次，使其充分作用；

（6）用1640培养液将细胞洗涤3次，1000r/min离心5min，弃去上清液；

（7）在细胞沉淀物中加125I标记的抗人TgG抗体，用含1%人血清白蛋白（HSA）的1640培养液将标记物稀释成7-10ug/mL。加入标记物后置4℃30min，每间隔5-10min轻摇1次；

（8）用含1%人血清白蛋白（HSA）的1640培养液洗涤3次，每次1 800r/rain离心10min；

（9）取细胞沉积物用Y计数器测cpm值；

（10）用热变性IgG40ug溶于50uL新鲜混合人血清中，然后倍比稀释成10个稀释度，按上述方法操作测定cpm。

3、结果判断

以热聚合IgC的含量为横坐标，cpm为纵坐标绘制标准参考曲线。自参考曲线查出IC中IgC的ug数，按ug/mL报告。

4、注意事项

（1）Raji细胞有时也带有Pc受体和表面膜免疫球蛋白，为使实验结果反映真实情况，应预试条件，同时在实验中加阴性对照。

（2）用热变性IsC作对照和参考时，一定要用新鲜血清作稀释剂，以补充补体。

除此以外，细胞受体结合免疫测定方法中的血小板凝集试验亦用于实验研究。其原理是免疫复合物与血小板相互作用后引起血小板表面发生改变，导致血小板凝集（有人认为血小板凝集与其表面Fc受体活化有关）。试验中必须采用新鲜分离的有活力的血小板，因为在IC存在时，血小板表面的改变有赖于其代谢状态。除IC外，高浓度的游离免疫球蛋白与血小板表面抗原反应的抗体和其他物质，如荷电分子、蛋白水解酶和某些粘病毒也可使血小板聚集；Clq、IgM、RF能抑制IC引起的血小板聚集；待检血清于试验前加热灭活，会使其血小板凝集滴度升高或降低。