免疫测定法

免疫测定法以抗原、抗体反应的特异性和亲和性为基础，具有快速、灵敏、简易的特点。放射免疫法（RIA）是其中发展较早的一种方法，其灵敏度和准确性均很高，是人体内 EPO 浓度测定的标准方法——最初关于人体内正常 EPO 浓度的测定基本上都采用这一方法。90 年代以来，不少学者又结合新技术，对其进行进一步的改进：Roberts-D等人通过血样的前处理，改进常规 RIA 检测，提高 EPO 检测的灵敏度。而随着 EPO-RIA试剂盒的出现，使该方法的操作更加简易，但由于 RIA 法毕竟涉及放射性元素，对人体不利，所以目前具有同样准确性和灵敏度的非放射免疫法更受广大学者的青睐。

尿样
抗体、聚丙烯酰胺凝胶、pvdf膜、电泳缓冲、转膜缓冲液
液相分析仪 疏水柱 紫外分光光度计 电泳仪 酶标板 转膜仪

放射免疫法主要包括酶免分析法（包含 EIA 与 ELISA）、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法等。

酶联免疫法没有放射性，并且在显色机理和方法的选择上比较灵活（目前见于报道的有 ELISA 法）。但由于酶法建立在光度法基础上，受显色剂有限的吸光度和动力学范围的限制，故灵敏度不高。因此 Rossi-R 等在检测中以单克隆抗体代替以往的多克隆抗体，使酶联免疫法的灵敏度得到进一步的提高，对体液中 EPO 含量的检测达到了 10-11M的灵敏度（与放免法相当）。

荧光免疫检测（FIA）是非放射免疫法中灵敏度最高的，它常用来检测含量很低的生物活性物质。近年来利用特殊的荧光探针，建立有效的 FIA 法对 EPO 进行检测也成为众多学者关注的点，如从螺旋藻中提取藻胆蛋白作为荧光探针等。

此外化学放光免疫分析（CLIA）是另一个较为活跃的研究领域，它具有灵敏度高、本底低的特点。且 CLIA 的灵敏度一般均高于酶免疫分析法。目前已有利用 CLIA 原理制成了试剂盒出售

 

由于 EPO 本身的生理特性，检测外源性 EPO 有众多困难：

1.EPO 在体液中含量低。正常人体液中 EPO 的含量仅为每毫升纳克级，血液中为130-230ng/mL。

2.EPO 与 rhEPO 结构相似。两者具有完全相同的氨基酸序列，仅 N 端所接的糖基略有差别。

3.EPO 在血液中的半衰期短。一般报道静注为５-６小时。

4.个体之间及个体本身的 EPO 浓度差异很大。

随着免疫分析的不断发展，一些新的分析手段和方法不断出现，尤其关于试纸条的设想，使免疫分析法更具有广阔的发展前景。

来源于《EPO 的检测技术研究进展》