抗体制备技术的选择（下）

从分离到表达

不同的抗体重组技术可以用于制备不同的抗体，工业上和学术界都发展了许多相关的技术，噬菌体展示就是其中的主导技术。昆虫和哺乳动物细胞的表达系统从理论上而言是相似的，但是其它的分子进化类型需要重新提炼和分离抗体。

剑桥抗体技术（Cambridge Antibody Technologies）和其它研究单位的大规模抗体库的筛选通常都是一些方法组合，例如噬菌体展示和核糖体展示组合，进一步提高抗体的亲和力。

然而，较少的抗体库能通过商业途径获得，因为知识产权从某种程度山而言已经阻碍了该技术的发展。

噬菌体展示

噬菌体展示技术就是将天然免疫和获得性免疫个体中分离的抗体基因插进噬菌体DNA中。抗体分子包括抗体的可变区域，该区域能与抗原结合，称作scFv，被连接到噬菌体衣壳蛋白上。噬菌体感染大肠杆菌后，单链DNA在宿主内复制，并且噬菌体重新组装，分泌到培养基中去，同时不会裂解宿主大肠杆菌。噬菌体与靶标抗原孵育，结合上去的噬菌体分离后，扩增，纯化。这种方法能轻易的筛选大量的克隆。

核糖体展示

该技术是基于一种稳定的抗体-核糖体-mRNA复合物的构象基础上的。因此与噬菌体展示技术较为相似。抗体蛋白与它的编码序列物理连接。抗体基因转录，产生许多mRNA分子，每一个代表着不同抗体基因。mRNA分子与细菌的核糖体孵育，然后mRNA翻译成蛋白质，但mRNA分子的3’端仍然未成熟，每个复合体展示一种不同的抗体，当经过一个含有靶标抗原的亲和柱子后，一些能结合上去的复合体不会被洗去，该展示技术完全在体外完成，并且不需要克隆就能完成大规模抗体库的构建。

酵母展示

酵母展示利用一个配对因子蛋白Aga2p在酿酒酵母来展示scFv，利用生物素标记抗原来分离想要的细胞。更进一步，可以利用荧光标记抗原，流式细胞仪来追踪实时的结合情况。

加州大学旧金山分校的James Marks说：“我们的大部分项目都在酵母上开展，利用酵母，可以轻易的得到生物化学信息。我们更热衷于利用这项技术来制备成熟的高亲和力抗体。”该技术能针对多种抗原表位产生抗体，但需要对酵母的遗传背景较为熟悉和流式细胞仪技术。同时与噬菌体展示技术相比，转化效率较低，需要大量的DNA来构建抗体库。但对于一些专家来说，酵母展示正在成为抗体获得和设计的主要技术。

杆状病毒展示

杆状病毒由于其能表达大量的活性蛋白已经成为最常见的昆虫细胞表达系统，已经报道每升昆从细胞能生产1-500mg的。抗体基因被插入多角体启动子的下游，使得能高水平分泌到库从细胞培养物中去。

该技术的不足是需要细心的培养，昆虫细胞需要大量的氧气。此外，时间是该技术的关键因素。稳定的转染有几种形式，包括抗生素和启动子的转染，利用杆状病毒展示技术可以避免噬菌体展示技术中遇到的一些蛋白折叠的问题。

哺乳细胞展示

在哺乳动物细胞中表达蛋白的优势是哺乳动物系统能即时的识别抗体。人类293细胞系和中国仓鼠细胞系是常用的哺乳动物细胞抗体表达系统，然而该技术需要使用大量的基因工程技术，并且哺乳动物细胞的生长需要耗费大量的时间，同时产量也不尽人意。

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