转化毕赤酵母
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1956
实验试剂
RD(Regeneration Dextrose) 融化琼脂100ml
40%PEG：用水配制40%(w/v)PEG3350(试剂纯)
实验材料
GS115中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Mut 重组子
KM71中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Muts重组子
对照包括无DNA，线性化PBR322DNA及质粒(无细胞)涂板来检测是否有污染
实验步骤
1) 将RDB平板放于室温，准备好融化的RD上层琼脂，取出线性化DNA置于冰上。
4) 同时配制PEG/CaT溶液，计算所需用量，加入等量的40%PEG/CaT(1:1)。
5) 加1ml新鲜的PEG/CaT溶液至细胞与DNA混合物中，轻轻混匀，室温孵育10min。
6) 室温750g离心10min，小心抽吸PEG/CaT溶液，颠倒管，轻叩管壁以排出多余的PEG/CaT溶液。
7) 用150ulSOS培养基悬浮转化细胞，室温孵育20min。
2. 涂板：毕赤酵母去壁细胞需要铺在顶层琼脂糖或琼脂上，以防止在选择前被裂解
1) 接第8步，取100-300ul去壁细胞-DNA，与10ml融化的RD琼脂糖混匀倒于RDB平板上，直至上层琼脂变硬。注意，确保有足够的去壁细胞-DNA铺第二板，第三板。
2) 倒置平板，28-30度孵育，转化子会在4-6天内出现。
3) 细胞活性：用100ul去壁细胞加入900ul 1M山梨醇。
