淋巴细胞的分离技术
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实验原理
混合的单核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则通过尼龙毛柱,这是获得富含T细胞群的有效方法。
实验设备
1. 尼龙毛(Femwall Laboratories,LP-1 Leukoqak leukocyte Filters)。
实验材料
取自然沉降的上层血浆,过聚蔗糖—泛影葡胺分层液后,获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。
实验步骤
1) 戴上已经洗去滑石粉的一次性手套,将尼龙毛(1包或2包,每包35g)放入烧杯中,加入蒸馏水或去离子水,用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。
4) 将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内,37℃温箱干燥2~3天后,贮藏在带盖的方盘内。
1) 取50ml玻璃注射器,拔去注射芯,在注射器头上套一段带夹子的胶管。
2) 将尼龙毛梳理,并适当折叠,以适应注射器的直径,填入注射器内,约20ml的体积。
1) 将注射器固定在支架上,倒入37℃的细胞培养液,关闭阀门一定时间,然后打开阀门,放掉细胞培养液,以清洗几次尼龙毛,关上阀门。
2) 将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度,约5.00×107个细胞/ml。
3) 将细胞液倒入注射器内,使之没过尼龙毛柱。盖上注射器,37℃温育45min至1h。
6) 关闭注射器下口,于注射器内加入0.85%冰冷生理盐水,振荡,并套上注射器芯,打开下口,使劲推出注射器内液体,即获得粘附于尼龙毛上的B淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等。
注意事项