淋巴细胞的分离技术
互联网
1539
实验原理
混合的单核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。
实验设备
1. 尼龙毛(Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte Filters)。
实验材料
取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖—泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。
实验步骤
1) 戴上已经洗去滑石粉的一次性手套，将尼龙毛(1包或2包，每包35g)放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。
4) 将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内，37℃温箱干燥2～3天后，贮藏在带盖的方盘内。
1) 取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。
2) 将尼龙毛梳理，并适当折叠，以适应注射器的直径，填入注射器内，约20ml的体积。
1) 将注射器固定在支架上，倒入37℃的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，以清洗几次尼龙毛，关上阀门。
2) 将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约5.00×107个细胞／ml。
3) 将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱。盖上注射器，37℃温育45min至1h。
6) 关闭注射器下口，于注射器内加入0.85％冰冷生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打开下口，使劲推出注射器内液体，即获得粘附于尼龙毛上的B淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等。
注意事项
