B 淋巴细胞增殖实验
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简介
B 淋巴细胞增殖通常是在有丝分裂原等抗原性物质的刺激下发生的增殖、分化，转化为 T 淋巴母细胞过程。
材料与仪器
器材：96 孔细胞培养板、吸管、刻度离心管、37℃，5％ CO2 细胞培养箱、细胞收集器、β 液闪计数仪等。
试剂：
① 小鼠 B 淋巴细胞悬液。
② LPS。
③ 3 H-TdR 工作液。
④ MicroScint-O cocktail。
步骤
B 淋巴细胞增殖试验的基本过程可分为如下几步，本方法以 LPS 刺激小鼠 B 淋巴细胞为例：
A. 将 B 淋巴细胞悬液浓度调整为 1x106 个/ml - 5x106 个/ml，加入 96 孔培养板，100μl/孔。
B. 用无血清培养液将 LPS 的浓度调整为（1-100 μg/ml；或 2-200 μg/ml 的 anti-IgM）。设 3 个刺激浓度。
C. 加入 3 个剂量组的 LPS，100μl/孔，同时设只加培养液的阴性对照，每组 3 复孔。
D. 37℃，5％ CO2 细胞培养箱中培养 48-72 小时。
E. 在培养细胞中每孔加入 20μl 3 H-TdR（1μCi/ml），继续培养 4 小时。
F. 用多头细胞收集器将每孔培养物收集到 UniFilter 96 孔微孔板上，洗涤数次。
G. 微孔板放置 50℃ 烘干 1 小时，封闭板底，每孔加 25-50μl MicroScint-O cocktail。
H. 在 β 液闪计数仪上测定每个样品 cpm 值。
来源：丁香实验
