噬菌体抗体库的富集筛选
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实验步骤
1. 将用于筛选特异性抗体的抗原用0.1mol/L pH值8.6碳酸钠碳酸氢钠溶液做一定量稀释后包被96孔板，一般抗原浓度要求至少25μg/ml，每孔50~60μl，4℃过夜。
2. 次日洗去板中未吸附的抗原，用3% BSAPBS或用4%~5%脱脂奶粉PBS于37℃封闭1h 。
3. 弃封闭液，在每孔加入50~70μl噬菌体抗体库，37℃孵育2h。
6. 每孔加入pH值2.2的甘氨酸盐酸洗脱缓冲液50μl，室温孵育10min，期间用移液器吸头反复吹打几次，但注意勿吹出过多气泡。
7. 加入3~5μl 2mol/L Tris，使溶液的pH值在7.0左右，以中和洗脱下来的噬菌体溶液。
8. 立即加入2ml新鲜制备的OD600 =1左右的Ecoli XLIBlu菌，室温孵育15~20min。
10. 加入100ml SBA T (SB培养基，50~100μg/ml氨苄青霉素，10μg/ml四环素)，37℃ 1h。
11. 加入1012pfu的辅助噬菌体VCSM13，37℃ 2h。
12. 加入卡那霉素70μg/ml，37℃振荡培养过夜。
14. 经三轮富集筛选后，将洗脱下来的噬菌体感染新鲜制备的XLIBlu菌，37℃过夜培养后，保存长有单个菌落的平皿于4℃待用。
