3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法
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实验原理
3HTdR掺入法最初是利用分离纯的淋巴细胞进行试验，近年来逐渐推广采用微量全血法，该法具有采样少，操作简便，并能较正确地反映整个机体免疫状态等优点。
实验试剂
4. 3HTdR最好选用比活性为2～10mol/mg分子的制品，将1mci/ml溶液用生理盐水稀释为100μol/ml，于4℃冰箱保存，临用时，再用培养液稀释成10μol/ml溶液。
8. 闪烁液PPO(2,5二苯基口恶唑)5g，POPOP〔1,4双(5苯基口恶唑基2苯)〕0.3g，无水乙醇200ml，甲苯800ml。
实验设备
国产FJ353型或YSJ76型液体闪烁计数器，恒温箱，水浴箱，离心机，培养瓶(10ml链霉素瓶)，其他常用器材。
实验步骤
2. 无菌取静脉血0.5～1.5ml，按每毫升血加入肝素125u抗凝，进行白细胞计数及分类。
3. 将肝素抗凝血液样品注入含1ml培养液的培养瓶内，每瓶0.1ml，每份样品2～3管，37℃培养72h。在培养结束前16～24h，每瓶加入3HTdR 1μol。
4. 培养结束后，将培养物移到离心管内，用3%冰醋酸6ml分两次冲洗培养瓶，并将冲洗液也放入离心管内，2000 r/min离心10min，如此反复两次。
5. 最后在沉淀中加30% H2 O2 1滴，85℃水浴加温15min，待溶液呈无色，再加浓甲酸0.5ml后，继续加热30min，使沉淀物完全消化溶解。
6. 将消化溶解的液体移于测样杯内，用红外线灯或80℃热空气烘烤至液体体积少于0.1ml，加闪烁液5ml，用液体闪烁计数器测定每分钟脉冲数(cpm)。
7. 取各管测定读数的平均值，即为0.1ml全血检测的脉冲数。再按血样淋巴细胞计数结果，校正成每百万淋巴细胞的脉冲数(cpm/106 淋巴细胞)。
亦可用刺激指数(SI)表示试验结果。为此，须在培养时设同样数量的不加PHA的对照管，试验管脉冲数之比即为刺激指数。SI=加PHA管cpm不加PHA管cpm。
注意事项
3. 闪烁样品制备有关问题培养后制备闪烁测定样品的方法大体有均相法(或称溶解法)和滤膜法两类。
