土壤微生物DNA提纯方法及纯度检测
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实验试剂
DNA提取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3 PO4 , 1.5 M NaCl, pH 8.0)
TENP缓冲液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)
PBS(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2 HPO4 , 2 mmol/L KH2 PO4 , pH 7.4)
实验设备
实验材料
实验步骤
1. 聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)在DNA提取过程中的纯化作用比较
(2) 称取0.1 g土样加入0.1g PVPP,加入500 μL DNA提取缓冲液,其余同(1);
(3) 称取0.1 g土样加入0.1g PVP,加入500 μL DNA提取缓冲液,其余同(1);
(3) 结合Sephadex柱和PVPP柱:取100 μL粗DNA样品,经PVPP柱10 000 r/min离心1 min,再经Sephadex柱3 000 r/min离心1 min;
(1) 低电压长时间电泳法:1%琼脂糖凝胶电泳在25 V进行4~8 h以上;