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液相色谱常见问题及处理办法

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    问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

  关于漂移问题:

  1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定

  2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

  3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡

  关于快速变化问题:

  1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定

  2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。

  3.流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

  问:色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

  答:1.柱效要高

  2.热稳定性好

  3.化学惰性强

  具体选择应注意

  1.柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析

  2.柱子内径。内径大小决定柱容量

  3.液膜厚度。分析样品温度不一样,对膜厚有不同要求,温度高液膜要厚,温度低液膜要薄

  4.柱长度。柱越长,柱效越高,分离效果越好,但也存在吸附问题,柱子过长,分析时间长,因此要根据样品考虑柱子长度

  5.外涂层(柱体)的选择。

  6.另外还有仪器型号、分析对象等因素

  问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

  答:1.筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。

  2.存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子

  问:从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

  答:1.分配容量(或容量因子)K,好的柱子在高温运行后,分配容量K不应有明显的下降,否则,说明柱子的热稳定性不好

  2.理论塔板数n,热稳定性好的柱子经受高温后,理论塔板数应基本保持恒定

  3.柱子的极性。热稳定性好的柱子,高温前后极性变化不大,具体表现为保留指数I值没有大的变化。

  4.噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后,噪声不能增加。

  5.柱子的去活层,毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后,去活层不应该变化,表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

  问:为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?

  答:进样器内的玻璃衬套主要有下列作用:

  1.提供一个温度均匀的汽化室,防止局部过热。

  2.玻璃的惰性不不锈钢好,减少了在汽化期间样品分解的可能性。

  3.易于拆换清洗,以保持清洁的汽化室表面,一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室,高温下会慢慢分解,使基流增加,噪声增大,通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。

  4.可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套,以改变汽化室的体积,而不用更换整个进样加热块。

  从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因

  问:毛细管色谱分流进样时,非线性分流的主要原因是什么?

  答:1.进样器温度太低,样品汽化不完全,发生分级分流。

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