液相色谱常见问题及处理办法

    问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？

　　关于漂移问题：

　　1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

　　2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

　　3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

　　关于快速变化问题：

　　1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

　　2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

　　3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

　　问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？

　　答：1．柱效要高

　　2．热稳定性好

　　3．化学惰性强

　　具体选择应注意

　　1．柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析

　　2．柱子内径。内径大小决定柱容量

　　3．液膜厚度。分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄

　　4．柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度

　　5．外涂层（柱体）的选择。

　　6．另外还有仪器型号、分析对象等因素

　　问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

　　答：1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

　　2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

　　问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏？

　　答：1．分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好

　　2．理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定

　　3．柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

　　4．噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加。

　　5．柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

　　问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？

　　答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：

　　1．提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。

　　2．玻璃的惰性不不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。

　　3．易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。

　　4．可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。

　　从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因

　　问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？

　　答：1．进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。