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气相色谱法测定依达拉奉合成原料乙酰乙酸乙酯中的丙酮溶剂残留

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[摘要] 目的:用气相色谱法测定依达拉奉合成起始原料乙酰乙酸乙酯中丙酮的残留量。方法:采用固定相为二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球(直径为0.18 mm~0.25 mm),氮气为载气, 用外标法测定乙酰乙酸乙酯中残留丙酮的含量。结果:该方法在丙酮浓度范围在25 μg/ml~400 μg/ml内呈良好的线性关系,响应曲线相关系数为0.996,平均回收率为96.8%。结论:本法简便,快速、实用,灵敏度高,可有效地用于乙酰乙酸乙酯的质量控制。

[关键词] 气相色谱法;依达拉奉乙酰乙酸乙酯;丙酮;残留量

  Determination of Residual Acetone in Acetoacetic Ester (the raw Material for the Synthesis of Edaravone) by Gas Chromatography

  Abstract:Objective To determine the contents of residual acetone in acetoacetic ester,the raw material for the synthesis of Edaravone, by gas chromatography.Methods Sample solution was injected on a GDX column (0.18 mm~0.25 mm) with nitrogen as the carrier gas.The residue was calculated by the external standard method.Results The linearity was good over the range of 25 μg/ml~400 μg/ml,with the correlation coefficient of acetone being 0.996 and the average recovery 96.8%.Conclusions The method was proved to be simple,rapid,practical and highly sensitive.It is an efficient method for the quality control of acetoacetic ester.

  Key words:Gas chromatography;Edaravone;Acetoacetic ester;Acetone;Residue

  依达拉奉是日本MitsubishiTokyoPharmaceuticals(MTP)公司开发的用于治疗急性脑卒中的新药,它作为神经保护剂和自由基清除剂在脑缺血时能使自由基的毒性减弱或消失,减小梗死面积,减轻神经损伤,达到脑保护作用。依达拉奉化学名为3甲基1苯基2吡唑啉5酮[1]。日本厚生省指出,从2001年6月该药首次在日本上市至2002年9月底,接受过该药静脉注射的患者大约有14.6万例。结果表明该药可以改善神经症状,缓解急性脑梗死。厚生省的不良药物反应 (ADR)快报报道了依达拉奉与急性肾衰、黄疸有关后,7月份对该药的使用警告进行了修改[2]。要求对其他潜在的严重不良反应增加新的安全警告,包括粒细胞减少症、急性肺部疾病 (acutepulmonarydisor ders)、横纹肌溶解以及肝炎[3]。

  本文从药学质量控制中,对依达拉奉合成原料之一乙酰乙酸乙酯内控质量标准进行研究,参照乙酰乙酸乙酯的行业标准(HG 230792)[4],在乙酰乙酸乙酯化工行业标准的基础上增加了有机溶剂残留量丙酮(ICH质量要求中应限制的第三类溶剂)进行探讨中研究,为依达拉奉合成起始原料质量标准制定提供参考依据。

  1仪器与试药

  1.1仪器  安捷伦-1790型气相色谱仪,氢火焰离子检测器,数据处理机为3295积分仪。

  1.2试药  乙酰乙酸乙酯(常州市新华活性材料研究所,分析纯,批号:20000218),丙酮(分析纯),水为超纯水。

  2实验方法

  2.1色谱条件  色谱柱:401色谱柱;固定相:二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球(直径为0.18 mm~0.25 mm);载气:氮气;流速:20 ml/min;空气流速:300 ml/min;氢气流速:30 ml/min;进样器温度:150 ℃;检测器温度:150 ℃;柱温:120 ℃;进样量:2 μl。
 2.2供试品溶液的制备  精密称取乙酰乙酸乙酯1.0 g,分别置50 ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

  2.3标准溶液的制备  精密称取丙酮500 mg,置100 ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,得标准贮备液A (5 000 μg/ml)。

  精密量取丙酮标准贮备液A 1 ml置50 ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得标准液B(100 μg/ml)。

  3结果

  3.1气相色谱  空白溶剂(水)峰的保留时间约为0.5 min;丙酮标准液峰的保留时间约为4.3 min;检测限调节检测灵敏度和进样量,信噪比为3∶1使峰高为基线噪声的3倍左右,本方法测得丙酮检测限为2 ng。

  3.2标准曲线的绘制  分别精密量取丙酮标准贮备液0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml和4.0 ml至5个50 ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取上述不同浓度的标准溶液2 μl进样,测定各自峰面积(Y)。以丙酮浓度X对其峰面积Y作线性回归,回归方程为Y(峰面积)=4 574.5+262.7X(浓度)。相关系数r=0.996。结果表明:丙酮浓度在25 μg/ml~400 μg/ml范围内呈线性关系,结果见表1。

  表1  丙酮浓度与相应峰面积的关系丙酮浓度(略)

  3.3回收率试验  分别精密量乙酰乙酸乙酯1 ml至9个50 ml量瓶中,按取丙酮标准贮备液1.0 ml的80%、100%、120%比例分别加入,摇匀,加水稀释至刻度,摇匀,取上述不同浓度的标准溶液2 μl进样,测定,计算结果见表2。

  表2  回收率试验结果(略)

  3.5精密度考察试验  取本品1批样品,按含量测定法,测定6次,结果表明本品用气相色谱法测定含量具有良好精密度。计算结果见表3。

  表3 精密度试验结果(略)

  3.6结果  检查乙酰乙酸乙酯中丙酮的峰面积小于标准液的峰面积,共测乙酰乙酸乙酯中丙酮六批(结果见表4),得乙酰乙酸乙酯中丙酮量小于0.5%。

  表4  不同批次样品中丙酮残留量测定结果(略)
  
  4讨论

  丙酮在国际人用药品注册技术要求(ICH)属第三类溶剂,第三类溶剂属于低毒性溶剂,对人体或环境的危害较小,人体可接受的粗略浓度限度为0.5%。本次的实验结果可说明乙酰乙酸乙酯中丙酮的量可在0.5%范围内。

  本次实验所采用的气相色谱法,结果准确、稳定、重现性好,而且快速、实用,能够满足生产厂家对依达拉奉合成起始原料乙酰乙酸乙酯有机溶剂残留量丙酮分析的要求。

  参考文献:

  [1]安彦,霍秀敏.依达拉奉含量测定方法的比较[J].天津药学,2003,15(5):1213.

  [2]彭涛,王林.日本厚生省对依达拉奉发出警报[J].国外医学药学分册,2003,2.

  [3]肖志梅.依达拉奉在日本接受更多安全警告[J].中国药师,2004,9.

  [4]陈勇,汤元茂,陈锵.工业乙酰乙酸乙酯[S].中华人民共和国化工行业标准,HG 230792.

 

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