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丙酮沉淀法

相关实验:用酸沉淀法浓缩蛋白质实验

最新修订时间:

材料与仪器

含蛋白质的样品
丙酮(或其他有机溶剂如乙醇或甲醇)
Eppendorf 管(小塑料离心管) Eppendorf 管离心机(小型台式离心机) 混旋器

步骤

1. 加 1 ml冷丙酮(-20℃)至 200 ul 样品溶液,混匀。


2. -20℃: 放置 10 min。


3. 小型台式离心机离心 5 min。


4. 弃去上清液,使沉淀风干。


5. 于 1~2 倍沉淀体积的缓冲液中再悬浮沉淀。

注意事项

1. 反复用丙酮洗涤和沉淀蛋白质 。


2. 通过延长 -20℃ 的放置时间,达 2 h 以上,再用 27 000 × g 离心 10 min,可以定量沉淀小于 1 ug 蛋白质。


3. 中性盐提高蛋白质在有机溶剂中的溶解度,二价阳离子降低蛋白质在有机溶剂中的溶解度。

来源:丁香实验

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