用酸沉淀法浓缩蛋白质实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本次介绍的两种蛋白质浓缩的方法，是用酸和有机溶剂沉淀的方法，此法常常导致蛋白质变性。变性的蛋白质溶解度降低，能够通过离心在沉淀中使其复性。

来源：《蛋白质技术手册》

来源：丁香实验

操作方法

三氯醋酸沉淀法

1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100％的三氯醋酸（TCA），混匀；2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30 min （或在冷冻箱内放置 15 min ）；3. 10 000 ×g 离心 5 min；4. 弃去上清并用吸管吸净残留液；5. 将沉淀再悬浮于50～100％ 0.1N NaOH 溶液，混匀。

丙酮沉淀法

1. 加 1 ml冷丙酮（-20℃）至 200 ul 样品溶液，混匀。2. -20℃：放置 10 min。3. 小型台式离心机离心 5 min。4. 弃去上清液，使沉淀风干。5. 于 1～2 倍沉淀体积的缓冲液中再悬浮沉淀。