GC法测定肿痛气雾剂中的薄荷脑含量

摘要：目的：建立肿痛气雾剂中有效成分薄荷脑含量的气相色谱测定法。方法：色谱条件为1909IJ-413HP-5石英毛细管色谱柱，程序升温，柱温60℃，保持5min，以每分钟5℃的升温速率升至100℃，保持2min，分流比为25：1，FID检测器，内标物为萘。结果：薄荷脑浓度在0.01mg/ml～mg/ml范围内呈线性关系（r=0.9998），加样平均回收率为101.70%。RSD为2.08%（n=5）。结论：该方法前处理简单、灵敏度高、线性范围宽、分离效果好，结果准确可靠。
关键词：肿痛气雾剂；薄荷脑；气相色谱法
      新药肿痛气雾剂由七叶莲、三七、雪上一枝蒿、薄荷脑等组成，对跌打损伤、肩周炎、痛风、风湿关节痛及乳腺小叶增生等疾病有显著疗效。试行标准中，采用GC法测定薄荷脑的含量，前处理方法复杂，时间长等。本文进行了薄荷脑含量测定方法的再研究，结果如下。
1 仪器与试药
      美国Agilent公司6890气相色谱仪系统，包括氢火焰离子化检测器；7683全自动进样器；色谱柱：1909IJ-413HP-5石英毛细管柱。薄荷脑对照品(批号0728-200005)， 由中国药品生物制品检定所提供;肿痛气雾剂(批号20040126)，由云南省药物研究所制药厂提供；所用试药、试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 选择进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，分流比25:1，柱温60℃，保持5min，以每分钟5℃升温速率升至100℃，保持2min作为测定薄荷脑的系统条件。
2.2 系统适用性实验 按2.1中的色谱条件，分别取对照品溶液、内标物萘溶液、供试品溶液按1μl进样分析。被测组分分离效果较好，薄荷脑达记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线分离，理论板数按薄荷脑峰计算大于120000。
2.3 线性关系考察 精密称取薄荷脑对照品57.07mg，用无水乙醇定容于10ml容量瓶中.精密称取萘内标物513.55mg，用无水乙醇定容于50ml容量瓶中。精密量取上述对照品溶液0.2ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、2.0 ml，并分别精密加入上述萘溶液1ml，置于10ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度;吸取1.0μl注入气相色谱仪进行测定，每个浓度进样1次。以薄荷脑记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线构成之面积称峰面积>峰面积为纵坐标，薄荷脑浓度(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程(n=6)为：Y=809.00X-1.02.r=0.9998.Y-记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线构成之面积称峰面积>峰面积,X样品浓度(mg/ml)。
      以上结果表明，在该条件下，薄荷脑浓度在0.10～1.30mg/ml范围内有良好的线性关系。
2.4 精密度实验 取同一浓度的供试品溶液1.0μl，重复进样8次，以内标法计算，RSD为0.12%，结果表明此方法的精密度较好。
2.5 重复性实验 取同一批号的供试品2.5g6份，分别加入浓度为10.27mg/ml的内标物萘1ml，按含量测定方法分别进行供试品溶液制备、测定，以内标法计算，RSD为0.49%，结果表明此方法的重复性较好。
2.6 稳定性实验 取同一种浓度的供试品溶液，分别于室温0,1,2,3,6,12,24h后进样，7次测定得到的平均值为0.55mg/ml，RSD为0.49%。结果表明在24h内，供试品溶液有较好的稳定性。
2.7 回收率实验 取同一批号已知含量的供试品2.5g6份，分别加入浓度为10.13mg/ml的内标物萘1ml和一定量的薄荷脑对照品溶液，按含量测定方法分别进行供试品溶液制备、测定，结果表明此方法的回收率符合要求。
      以上方法学考察结果证明，该方法灵敏度高，精密度好，重现性及回收率变异系数均在3%以下，符合《中药新药研究的技术要求》中“质量标准”部分的规定。
3 讨论
3.1 系统条件的选择 通过查阅资料，我们选择了3个系统条件:（1）检测器为FID;柱温为150℃;进样器温度为230℃;检测器温度为230℃。（2） 柱温的初始温度为120℃，保持2min，先以每分钟2℃的升温速率升至140℃，保持2min，在以每分钟10℃的升温速率升至190℃，保持10min，分流比为20:1。（3）进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，分流比为25:1，柱温为60℃，保持5min，以每分钟5℃的升温速率升至100℃，保持2min。
      系统（1）、（2） 测定得到的薄荷脑峰不能达到记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线分离；系统（3）测定得到的薄荷脑峰与邻近峰达到记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线分离且分离度超过1.5，分离效果好，故采用系统（3）作为测定肿痛气雾剂中薄荷脑含量的系统条件。
3.2 提取溶媒的选择 根据肿痛气雾剂质量标准(试行)首先选择丙酮作为溶剂，出现的溶剂峰复杂，得到的薄荷脑峰不能达到记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线分离。考虑到药液里含有乙醇，因此选择了40%、60%、80%、90%及无水乙醇等不同浓度的乙醇作为溶剂进行比较，结果是无水乙醇作为溶剂测定时得到的薄荷脑峰能达到记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。>基线分离，且内标物萘在无水乙醇中易溶解。通过系统研究和方法学验证，上述的方法与原来的方法相比较，本法具有前处理简便、灵敏、准确等优点，为其质量控制提供了更科学的依据。
参考文献
1 中华人民共和国药典.2000.一部.附录Ⅵ
2 王北婴.中药新药研制与申报[M]北京:中国中医药出版社，1984
3 徐礼桑，沙世炎.中草药有效成分分析法[M].北京：人民卫生出版社，1984