微生物实验室非培养标本的采集及处理操作程序
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1目的：规范临床待标本的正确采集、送和处理。
2适用范围：微生物实室的所有临床测标本。
3职责：
31所有采集标本的人员均需按本SOP操作，实室工作人员有责任向临床医生、护士或病人宣教。
32本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
4操作程序
41本实室测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。
42做好标本签收，核对单与标本标签是否清楚无误，送标本是否正确、合格，给所有标本按顺序编号，按如下操作规程操作。
43查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片，液性标本以3000转/分钟离心5分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气，但无气泡产生为宜)染色10分钟，自来水冲洗净染液，以硫酸美兰复染2分钟，水洗凉干。
镜与报告：油镜下查找分枝、不规则红色杆菌，按如下标准进行结果报告。
1)、镜100-300个视野（时间不少于4分钟）未发现抗酸菌，继续观察至300个视野仍未发现抗酸菌者报告抗酸菌（-）；
2)、镜100个视野找到抗酸菌1-2条者，报告抗酸菌可疑（±），或重涂片或重送标本查；
3)、镜100个视野找到抗酸菌3-9条者，报告抗酸杆菌阳性（＋）；
4)、镜10个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性（2＋）；
5)、镜每个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性（3＋）；
6)、镜每个视野找到抗酸菌多于9条者，报告抗酸杆菌阳性（4＋）。
44查找普通细菌操作：液性标本取离心沉淀物涂片，拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株（ATCC25922）涂片，一起行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净；以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆比例；观察质控菌是否合格。
45墨汁染色查找隐球菌：液性标本离心取沉淀物涂片，脓性或拭子标本直接涂片并写号，以无菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀，压盖玻片，先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。若找到透亮，圆形强折光，有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性；否则报告阴性。
46白常规查：盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜有无滴虫；涂片标注编号后固定，行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净；以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗凉干后镜查找革兰氏阴性双球菌、霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告：
Ⅰ度：阴道杆菌为主，并可见大量上皮细胞。
Ⅱ度：有部份阴道杆菌，但亦有部份脓细胞和杂菌，上皮细胞少见。
Ⅲ度：仅见少量阴道杆菌和上皮细胞，有大量脓细胞和杂菌。
Ⅳ度：镜下无阴道杆菌，除少量上皮细胞外，主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。
47肥达试：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟；取试管架，按每标本排5排试管，每排5支；各标本用加样器取100靗血清置于一支稀释用试管(注明号)中，加入1909%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各02，成1：40倍；后稀释管再加入1009%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各02。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0209%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试稀释菌悬液，第一列各加入H诊断菌液02,第二列各加入O诊断菌液02，第三列各加入甲型诊断菌液02,第四列各加入乙型诊断菌液02,第五列各加入丙型诊断菌液02,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试。
48外菲氏试：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟；取试管架，按每标本排3排试管，每排5支；各标本用加样器取100靗血清置于一支稀释用试管(注明号)中，加入1909%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各02，成1：40倍；稀释管留10再加入1009%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各02。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0209%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试稀释菌悬液，第一列各加入OX19诊断菌液02,第二列各加入OX2诊断菌液02，第三列各加入OXK诊断菌液02,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试。
2适用范围：微生物实室的所有临床测标本。
3职责：
31所有采集标本的人员均需按本SOP操作，实室工作人员有责任向临床医生、护士或病人宣教。
32本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
4操作程序
41本实室测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。
42做好标本签收，核对单与标本标签是否清楚无误，送标本是否正确、合格，给所有标本按顺序编号，按如下操作规程操作。
43查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片，液性标本以3000转/分钟离心5分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气，但无气泡产生为宜)染色10分钟，自来水冲洗净染液，以硫酸美兰复染2分钟，水洗凉干。
镜与报告：油镜下查找分枝、不规则红色杆菌，按如下标准进行结果报告。
1)、镜100-300个视野（时间不少于4分钟）未发现抗酸菌，继续观察至300个视野仍未发现抗酸菌者报告抗酸菌（-）；
2)、镜100个视野找到抗酸菌1-2条者，报告抗酸菌可疑（±），或重涂片或重送标本查；
3)、镜100个视野找到抗酸菌3-9条者，报告抗酸杆菌阳性（＋）；
4)、镜10个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性（2＋）；
5)、镜每个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性（3＋）；
6)、镜每个视野找到抗酸菌多于9条者，报告抗酸杆菌阳性（4＋）。
44查找普通细菌操作：液性标本取离心沉淀物涂片，拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株（ATCC25922）涂片，一起行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净；以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆比例；观察质控菌是否合格。
45墨汁染色查找隐球菌：液性标本离心取沉淀物涂片，脓性或拭子标本直接涂片并写号，以无菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀，压盖玻片，先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。若找到透亮，圆形强折光，有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性；否则报告阴性。
46白常规查：盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜有无滴虫；涂片标注编号后固定，行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净；以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗凉干后镜查找革兰氏阴性双球菌、霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告：
Ⅰ度：阴道杆菌为主，并可见大量上皮细胞。
Ⅱ度：有部份阴道杆菌，但亦有部份脓细胞和杂菌，上皮细胞少见。
Ⅲ度：仅见少量阴道杆菌和上皮细胞，有大量脓细胞和杂菌。
Ⅳ度：镜下无阴道杆菌，除少量上皮细胞外，主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。
47肥达试：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟；取试管架，按每标本排5排试管，每排5支；各标本用加样器取100靗血清置于一支稀释用试管(注明号)中，加入1909%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各02，成1：40倍；后稀释管再加入1009%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各02。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0209%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试稀释菌悬液，第一列各加入H诊断菌液02,第二列各加入O诊断菌液02，第三列各加入甲型诊断菌液02,第四列各加入乙型诊断菌液02,第五列各加入丙型诊断菌液02,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试。
48外菲氏试：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟；取试管架，按每标本排3排试管，每排5支；各标本用加样器取100靗血清置于一支稀释用试管(注明号)中，加入1909%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各02，成1：40倍；稀释管留10再加入1009%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各02。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0209%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试稀释菌悬液，第一列各加入OX19诊断菌液02,第二列各加入OX2诊断菌液02，第三列各加入OXK诊断菌液02,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试。
