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抗人球蛋白-间接抗人球蛋白试验

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抗人球蛋白试验-间接抗人球蛋白试验:

原理:

抗人球蛋白试验(antiglobulintest,AGT),又称Coombs试验,是检查不完全抗体的一种很好方法。用人血清免疫家兔,产生抗人球蛋白抗体,即抗人球蛋白血清。将抗人球蛋白血清(AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中,红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应。使红细胞发生凝集。本试验可分为直接法和间接法两种。

(二)间接抗球蛋白试验本试验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体,或用已知抗血清测定受检红细胞上相应抗原。此法可用于鉴定血型和检查血清中不完全抗体、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。

1.试剂和材料

(1)抗人球蛋白血清(2)受检血清(或已知抗体的血清)

(3)5%已知抗原的红细胞悬液(或5%受检红细胞悬液)

(4)不完全抗D血清(5)AB型血清(6)5%阳性红细胞悬液

2.方法

(1)取试管3支,标明受检管、阳性对照及阴性对照。

(2)按下表将各反应物加入相应试管内。

(3)混匀,置37℃水浴1小时,用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后,将上清液除尽,并用滤纸将附着于管口的盐水吸去,每管各留红细胞悬液1滴。

(4)每管各加适当浓度抗人球蛋白血清1滴,混匀,以1000r/min离心1min,观察结果。

(5)结果判定。阳性对照管凝集,阴性对照管不凝集,受检管出现凝集者为阳性,表示受检血清中有不完全抗体(或受检红细胞上有相应抗原),如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。

(6)效价滴定。如受检血清中检出有不完全抗体,可将受检血清以盐水作倍量稀释后,按上法进行测定。

3.注意事项

(1)血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏的时间经研究发现,如致敏1小时,75%的抗体吸附于红细胞上,如致敏时间延长达2小时,抗体吸附达95%;如以低离子强度盐水溶液(LISS)代替生理盐水配制5%红细胞悬液,则致敏时间可减少,大多数抗体经致敏15~30min即可,但抗Fy和抗Jk抗体需较长的孵育时间医`学教育网搜集整理。

(2)红细胞洗涤应迅速,不应当中断停止,洗涤用盐水要足量,并用力冲入管底,使压积于管底的细胞分离。切勿用手指堵住管口,颠倒混匀,以防污染来自皮肤的蛋白。

(3)离心速度和时间十分重要,应按规定进行。原则上应以最小的离心力和最短的离心时间能使阳性对照管出现阳性反应为宜。

4.临床意义

(1)抗人球蛋白试验的直接法在临床上主要是检查被检者红细胞表面是否结合有不完全抗体,如新生儿溶血病病儿的红细胞被母体不完全抗体致敏;溶血性(血管外)输血反应时,献血者红细胞被受血者体内不完全抗体致敏;以及自身免疫性溶血性贫血病人红细胞被自身抗体致敏等。在临床上有较大意义。

(2)抗人球蛋白试验的间接法是用已知抗原的红细胞检查被检者血清中的不完全抗体,也可用已知抗血清测定被检红细胞是否含有相应抗原。在临床上此法可用于血型鉴定(如DU、Daffy、Kidd等),抗体的检出和鉴定。尚有助于D的检出,凡酶介质或其他方法为“d”红细胞,必须用本法证实。

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