单向扩散试验-免疫检验

单向扩散试验：琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散，如抗原和相应抗体结合，则形成沉淀环。

1、试管法：将一定量的抗体混入0.7%琼脂糖溶液中，注入小试管内，上层加抗原溶液使待测抗原在凝胶中自由扩散，在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。

2、平板法：是将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖内，未凝固前倾注成平板，然后在上打孔，将抗原加入孔中，放37℃让其自由扩散，24～48h后可见孔周围出现沉淀环，测定环的直径或面积计算标本中待测抗原的浓度医学教育|网搜集整理。有两种计算方法：l）Mancini曲线：适用大分子抗原的和长时间扩散（>48h）的结果，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系c/d2=k.（其中c为抗原浓度d为沉淀环直径k为常数）

3、单向扩散试验检测时的注意点：

（1）抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强，在良好条件下保存。

（2）每次测定都必须作标准曲线。

（3）每次测定时必须用质控血清作质控。

（4）注意双环现象（出现了两种抗原性相同成分）。

（5）应用单克隆抗体测量多态性抗原时，测定值偏低；用多克隆抗体测量单克隆病时，测定值偏高。