抗CyPA自身抗体与SLE关系的探讨

作者：陈英剑 李芳秋

摘要　以ｒｈＣｙＰＡ为包被抗原，用间接ＥＬＩＳＡ检测了４５例ＳＬＥ病人血浆抗ＣｙＰＡ自身抗体的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ三种类型，并探讨了此抗体与多项临床指标的相关性。结果显示，ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ三类抗ＣｙＰＡ自身抗体的阳性率分别为３６％，２０％，１８％，总阳性率为４８％。存在皮肤粘膜损害、白细胞减少、发热、并联能表现或活动期的ＳＬＥ病人抗ＣｙＰＡ自身抗体阳性率明显高于无相应症状或非活动期ＳＬＥ病人。

An investigation of relation between anti-CyP A autoantibody and SLE

CHEN Yingjian,LI Fangqiu,YU Wei, WU Jianguo

　　(Center of Medical Laboratory Science of PLA,Nanjing General Hospital of Nanjing Command,Nanjing　210002)

 

 

　　Abstract　45 patients with systemic lupus erythematosus(SLE)were studied for IgG,IgA and IgM anti-cyclophilin A autoantibodies using indirect ELISA and rhCyPA as coating antigen.It was investigated that the relation between these antibodies and several clinical indexes.Anticyclophilin autoantibodies were found in 48% of the SLE patients. The positive rate of IgG, IgA and IgM anti-cyclophilin A antibody is 36%, 20% and 18%, respectively. The prevelance of antibodies to CyPA in patients with skin and mucous lesion, leukopenia, fever, arthralgia or active SLE were statistically higher compared with patients without these clinical manifestations or inactive SLE.

 

　　Keywords　rhCyP A；SLE；Anti-CyP A autoantibody

 

 

　　Cyclophilin(CyP)是环孢素A的受体,也是肽脯氨酰顺反异构酶PPIase三家族成员之。CyP家族包括多种成员，其中CyP A是含量最多、最主要的一种。它在生物界广泛存在，结构保守，在细胞的生命活动中扮演着重要的角色［1］。以CyP A为靶抗原的自身抗体—抗CyP A自身抗体最早由Harigi等人于1992年发现［2］。研究表明，SLE病人血清抗CyP A抗体阳性率较高，且与疾病的活动性和某些特定的临床表现相关。

 

　　本实验室证实了抗CyP A自身抗体在SLE病人中有较高的阳性率(53.3%［3］，50.5%［4］)，还发现在其他的自身免疫性疾病也有一定的阳性率，但与者相比则低得多。尽管不能说此抗体是SLE的特异性抗体，但它的阳性率之高值得重视。对抗体进行分类发现，IgG、A、M三种类型的抗体都存在［5］。本研究检测了45例SLE病人抗CyP A自身抗体的三种类型，并进一步探讨了此抗体与SLE疾病表现和活动性的关系。

 

　　1　对象与方法

　　1.1　病人　SLE患者45例，由南京大学医学院附属鼓楼医院免疫科、山东医科大学附属医院风湿免疫科及本院肾脏病科共同提供，均符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准。其中女41例，男4例，平均年龄28.88(12～62)岁，平均病程3.6年(3月～17.5年)。南京市红十字会中心血站健康献血员40例作为正常对照。

　　1.2　标本　静脉取血,肝素抗凝,2小时内离心分离血浆,分装冻存于－20℃备用。避免反复冻融。

　　1.3　SLE活动性判断　记录收集标本时病人的临床表现及各项实验室指标，采用补充的Chubick法［6］判断疾病的活动性，≥4分为活动组，≥8分为重度活动组。

　　1.4　主要试剂及仪器　(1)rhCyP A：pET11/CyP A转化的大肠埃希菌BL21(DE3)常规培养表达[7]。收集菌体，超声裂解，离心取上清。50%饱和硫酸铵盐析，离心后沉淀用pH 7.8的Tris-HCl溶液溶解，对同种溶液透析，至透析液无NH+4存在。透析后粗提蛋白液行DEAE-Sepharose CL-4B柱层析，收集流穿蛋白，即rhCyP A，冷冻干燥保存。HPLC测得纯度＞95%，SDS-PAGE显示为单一条带，分子量与标准CyP A(Boehringer Mannheim公司产品)一致。(2)HRP标记的抗人γ链F(ab′)2、μ链F(ab′)2、α链F(ab′)2，为本科自制。(3)酶联免疫检测仪(Bio Rad)。

　　1.5　方法　采用间接ELISA。rhCyP A(1 μg/ml)作包被抗原，用10%新生小牛血清封闭。标本1:50稀释，一式三份，同时设阴、阳与空白对照。酶标抗人γ链F(ab′)2、μ链F(ab′)2、α链F(ab′)2分别1:800，1:4000，1:1000稀释。加样量均为100 μl/孔，置37℃反应1 h。底物用TMB-H2O2，37℃避光显色10 min，2 mol/L H2SO4终止反应，空白调零，读取450 nm波长吸光度。以正常对照组吸光度的平均值加两倍标准差(

 

 

　　1.6　统计学处理　采用χ2检验。

 

 

　　2　结果

 

　　2.1　45例SLE病人中22例抗CyP A自身抗体阳性，阳性率为48%，而40例正常对照中只1例阳性，阳性率为2.5%。两者相比差异非常显著(P＜0.01)。三类Ig(G、A、M)抗体的阳性率分别为36%(16/45)，20%(9/45)，18%(8/45)。

　　2.2　用补充的Chubick法判断，45例SLE病人中有27例处于活动期，抗CyP A自身抗体阳性率为63%(17/27)，与非活动组(28%，5/18)差别显著(P＜0.05)。其中重度活动组有12例，抗体阳性率75%(9/12)，与非重度活动组(53%，8/15)相比无统计学差异(P＞0.05)。SLE病人各项临床表现与抗CyP A抗体的关系见表1。

 

 

表1　SLE病人临床表现与抗CyP A抗体的关系

　　Table1　Relation between clinical manifestation of SLE and anti-CyP A autoantibody

 

 

　　Compared with patients without corresponding clinical manifestation　P＜0.05~undefinedP＜0.013