生化分析仪的校准

重庆医科大学附一院 陈宏础

　　一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手。

一． 选好测定方法；
二． 购买质量过硬的试剂盒；
三． 要有质优的测试仪器；
四． 必需进行正确的校准；
五． 还要规范化操作；
六． 搞好过硬的室内质量控制；
七． 积极参加室间质评活动；
八． 还要有一支素质高的队伍。

　　现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。

一、 校准的重要性和必要性
　　首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。

二、 确立测定系统的概念
　　对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。因此，测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该自己建立一个标准测定系统。在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立7170使用宝灵曼的试剂和校准品（c.f.a.s），在贝克曼CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。

三、 校准品和质控品
　　校准品（Calibration materials）含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。

　　 质控品（Control materials）只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。前者是校准其值而后者是控制误差用的。

四、 校准前准备
1 .了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；
2． 检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；
3． 用清洁剂泡洗管道
4． 测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？

五、 定值质控血清是否可以校准仪器？
　　我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上进行测定(用常规试剂)，详见质控血清对部份常规测定项目（如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT）结果与靶值比较：

表 不同厂家定值质控对TP、ALB、、AST、ALP结果与靶值比较

	TP	ALB	UREA	AST	ALP
	T	偏差 %	T	偏差 %	T	偏差 %	T	偏差 %	T	偏差 %
汽巴康宁 1	57	4.39	29	0	5.0	4.5	43	-10.5	96	4.2
汽巴康宁 2	46	4.89	24	2.08	19.3	-5.76	184	-11.7	265	0.2
宝灵 曼 1	50	2.0	34.8	-5.17	8.96	0.45	58.3	-11.2-	242	2.7
宝灵 曼 2	48.6	2.88	33.7	-5.04	24	-6.77	140	-12.3	384	2.7
RANDOX1	59.7	6.36	40.8	3.88	7.67	4.3	62	-17.7	214	-16.1
RANDOX2	39	8.33	26.9	5.98	21.6	-5.67	144	-12.7	394	-17.1
Human1	72	4.18	46.7	-4.18	3.78	5.16	33.5	-7.5	168	-2.2
Human2	29.8	-2.68	29.8	-2.76	25.1	-5.08	151	-11.7	287	-9.1
Bio-Red1	63	0	39	1.28	7.1	0	24	-14.6	25	22
Bio-Red2	42	1.79	27	0	18.0	-4.44	201	-14.3	298	0.84

~undefined 从总蛋白结果来看RANBOX与Bio-Red 相差为6.45%，而宝灵曼与Bio-Red 较为接近；
~undefined 从白蛋白结果分析，宝灵曼与Bio-Red相对相差5.75%，与总蛋白结果明显不同。Bio-Red则与汽巴康宁比较接近。
~undefined UREA结果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能与我们采用试剂盒的质量有关，所以试剂盒的线性范围理应成为选择试剂盒的重要依据之一。但从低值结果分析，也有5%的偏差（Bio-Red与Human）
~undefined AST与ALT测定值均低于靶值，这就涉及我们选用什么K值问题。
~undefined ALP测定中RANDOX（-16.6%）与宝灵曼（2.7%）靶值之间竟相差19.3%，这可能涉及试剂盒选用缓冲液种类，PH值以及所用ε值等有关。

　　通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我们决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。

六、 校准方法
　　例如日立(Hitachi)系列您必须购买宝灵曼(Boehringer)的试剂及其校准的说明书设置参数，用c.f.a.s.校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测定。此时得到的K值即为准确的校准K值，然后测定待测的10至20份新鲜血清三次取其平均值，应该说此结果是用Hitachi-Boehringer检测系统所获的测定值。然后用此血清值校准其它测定系统。
表 日立7170、BM试剂连续四个月每天进行校正(n=81)K值的变化

	TP	ALB	ALT	AST	Crea	Urea	UA	TG	Chol	Glu	Ca	CK	GGT
Mean	3017	694	3023	2274	14756	2673	1543	1272	1449	1744	592	3864	2603
SD	86	6.69	63	49.7	1448	50.2	16.1	16.9	17.4	18.4	56.8	61.11	67.9
CV%	2.8	1.0	2.1	1.7	9.8	1.9	1.1	1.4	1.2	1.0	9.6	1.6	6.9

~undefined 从总蛋白结果来看 RANBOX 与 Bio-Red 相差为 6.45% ，而宝灵 曼 与 Bio-Red 较为接近；

七、 关于酶活性测定校准问题
　　有的主张不进行校准而采用固定K值，有的作者以为应该进行校准。酶活力计算公式如下：
酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1)
令k=V×106/（ε×v）
则酶活力（u/l）=△A/min×k
常用K值有以下几种：
a) 理论K值：根据理论摩尔消光系数（ε）来计算，如NADH为6.22×103
b) 实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值
c) 厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供6.3×103）
d) 校准K值：通过校准物直接校准得到的K值
在日立7170A全自动生化分析仪上，可以得到几种不同的酶K值，见下表
表 日立7170A全自动生化分析仪上用不同方法得到几种酶的K值

	指示物	波长	理论 K 值	实测 K 值	校准 K 值
ALT	NADH	340nm	2444	2642 （ 8.1% ）	3026 （ 23.8% ）
AST	NADH	340mm	2444	2642 （ 8.1% ）	2775 （ 13.5% ）
CK	NADPH	340mm	3878	3878 （ 8.1% ）	3886 （ 8.3% ）
GGT	4NA	405mm	1418	1539 （ 8.5% ）	1612 （ 13.7% ）
GGT	4NB	405mm	1475	1739 （ 17.9% ）	——
ALP	4NA （ PH10 ）	405mm	757	825 （ 8.9% ）	——

注：1校准物为宝灵曼c.f.a.s，试剂也用宝灵曼的配套试剂。
2括号内数字是该K值与理论K值相比的变化率
以上摘自张克坚文章中

~undefined 从上述K值中不难发现实测K值大于理论K值，这说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；
~undefined 校准K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；
~undefined 作者认为最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1必须使用配套的试剂；2必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性。
关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）均发表了人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。

八、 必须拟订校准计划（文件）
　　校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照“临床实验室质量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：
1．建立校准方法
⑴选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；
⑵如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；
⑶确定校准的频度。至少每六个月进行一次校准；
⑷如有下列情况发生时，必须进行校准
~undefined 改变试剂的种类，或者批号更换了。如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；
~undefined 仪器或者检验系统进行一次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；
~undefined 质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；
2．每个实验室对每台仪器必需要有校准计划。每次校准必须有详情的记录和分析。每次校准记录必须保存备查。

摘自《中华医疗器械工作站》