生化分析仪的校准
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一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手。
一． 选好测定方法；
二． 购买质量过硬的试剂盒；
三． 要有质优的测试仪器；
四． 必需进行正确的校准；
五． 还要规范化操作；
六． 搞好过硬的室内质量控制；
七． 积极参加室间质评活动；
八． 还要有一支素质高的队伍。
现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。
一、 校准的重要性和必要性
首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。
二、 确立测定系统的概念
对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。因此，测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该自己建立一个标准测定系统。在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立7170使用宝灵曼的试剂和校准品（c.f.a.s），在贝克曼CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。
三、 校准品和质控品
校准品（Calibration materials）含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。
质控品（Control materials）只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。前者是校准其值而后者是控制误差用的。
四、 校准前准备
1． 了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；
2． 检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；
3． 用清洁剂泡洗管道
4． 测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？
五、 定值质控血清是否可以校准仪器？
我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上进行测定（用常规试剂），详见质控血清对部份常规测定项目（如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT）结果与靶值比较：
TP | ALB | UREA | AST | ALP | ||||||
T | 偏差% | T | 偏差% | T | 偏差% | T | 偏差% | T | 偏差% | |
汽巴康宁1 | 57 | 4.39 | 29 | 0 | 5.0 | 4.5 | 43 | -10.5 | 96 | 4.2 |
汽巴康宁2 | 46 | 4.89 | 24 | 2.08 | 19.3 | -5.76 | 184 | -11.7 | 265 | 0.2 |
宝灵曼1 | 50 | 2.0 | 34.8 | -5.17 | 8.96 | 0.45 | 58.3 | -11.2- | 242 | 2.7 |
宝灵曼2 | 48.6 | 2.88 | 33.7 | -5.04 | 24 | -6.77 | 140 | -12.3 | 384 | 2.7 |
RANDOX1 | 59.7 | 6.36 | 40.8 | 3.88 | 7.67 | 4.3 | 62 | -17.7 | 214 | -16.1 |
RANDOX2 | 39 | 8.33 | 26.9 | 5.98 | 21.6 | -5.67 | 144 | -12.7 | 394 | -17.1 |
Human1 | 72 | 4.18 | 46.7 | -4.18 | 3.78 | 5.16 | 33.5 | -7.5 | 168 | -2.2 |
Human2 | 29.8 | -2.68 | 29.8 | -2.76 | 25.1 | -5.08 | 151 | -11.7 | 287 | -9.1 |
Bio-Red1 | 63 | 0 | 39 | 1.28 | 7.1 | 0 | 24 | -14.6 | 25 | 22 |
Bio-Red2 | 42 | 1.79 | 27 | 0 | 18.0 | -4.44 | 201 | -14.3 | 298 | 0.84 |
通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我们决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。
六、 校准方法
例如日立（Hitachi）系列您必须购买宝灵曼（Boehringer）的试剂及其校准的说明书设置参数，用c.f.a.s.校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测定。此时得到的K值即为准确的校准K值，然后测定待测的10至20份新鲜血清三次取其平均值，应该说此结果是用Hitachi-Boehringer检测系统所获的测定值。然后用此血清值校准其它测定系统。
表 日立7170、BM试剂连续四个月每天进行校正(n=81)K值的变化
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|
TP
|
ALB
|
ALT
|
AST
|
Crea
|
Urea
|
UA
|
TG
|
Chol
|
Glu
|
Ca
|
CK
|
GGT
|
|
Mean
|
3017
|
694
|
3023
|
2274
|
14756
|
2673
|
1543
|
1272
|
1449
|
1744
|
592
|
3864
|
2603
|
|
SD
|
86
|
6.69
|
63
|
49.7
|
1448
|
50.2
|
16.1
|
16.9
|
17.4
|
18.4
|
56.8
|
61.11
|
67.9
|
|
CV%
|
2.8
|
1.0
|
2.1
|
1.7
|
9.8
|
1.9
|
1.1
|
1.4
|
1.2
|
1.0
|
9.6
|
1.6
|
6.9
|
七、 关于酶活性测定校准问题
有的主张不进行校准而采用固定K值，有的作者以为应该进行校准。酶活力计算公式如下：
酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1)
令k=V×106/（ε×v）
则酶活力（u/l）=△A/min×k
常用K值有以下几种：
a) 理论K值：根据理论摩尔消光系数（ε）来计算，如NADH为6.22×103
b) 实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值
c) 厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供6.3×103）
d) 校准K值：通过校准物直接校准得到的K值
在日立7170A全自动生化分析仪上，可以得到几种不同的酶K值，见下表
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|
指示物
|
波长
|
理论K值
|
实测K值
|
校准K值
|
|
ALT
|
NADH
|
340nm
|
2444
|
2642（8.1%）
|
3026（23.8%）
|
|
AST
|
NADH
|
340mm
|
2444
|
2642（8.1%）
|
2775（13.5%）
|
|
CK
|
NADPH
|
340mm
|
3878
|
3878（8.1%）
|
3886（8.3%）
|
|
GGT
|
4NA
|
405mm
|
1418
|
1539（8.5%）
|
1612（13.7%）
|
|
GGT
|
4NB
|
405mm
|
1475
|
1739（17.9%）
|
——
|
|
ALP
|
4NA（PH10）
|
405mm
|
757
|
825（8.9%）
|
——
|
注：1.校准物为宝灵曼c.f.a.s，试剂也用宝灵曼的配套试剂。
2.括号内数字是该K值与理论K值相比的变化率
以上摘自张克坚文章中
关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）均发表了人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。
八、必须拟订校准计划（文件）
校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照“临床实验室质量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：
1.建立校准方法
①选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；
②如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；
③确定校准的频度。至少每六个月进行一次校准；
④如有下列情况发生时，必须进行校准。
2.每个实验室对每台仪器必需要有校准计划。每次校准必须有详情的记录和分析。每次校准记录必须保存备查。
