生化分析仪的校准

重庆医科大学附一院 陈宏础

一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手。

一． 选好测定方法；
二． 购买质量过硬的试剂盒；
三． 要有质优的测试仪器；
四． 必需进行正确的校准；
五． 还要规范化操作；
六． 搞好过硬的室内质量控制；
七． 积极参加室间质评活动；
八． 还要有一支素质高的队伍。

　　现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。

　　一、 校准的重要性和必要性

　　首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。

　　二、 确立测定系统的概念

　　对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。因此，测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该自己建立一个标准测定系统。在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立7170使用宝灵曼的试剂和校准品（c.f.a.s），在贝克曼CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。

　　三、 校准品和质控品

　　校准品（Calibration materials）含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。
质控品（Control materials）只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。前者是校准其值而后者是控制误差用的。

　　四、 校准前准备

　　1 .了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；

　　2． 检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；

　　3． 用清洁剂泡洗管道

　　4． 测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？

　　五、 定值质控血清是否可以校准仪器？

　　我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上进行测定(用常规试剂)，详见质控血清对部份常规测定项目（如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT）结果与靶值比较： 表 不同厂家定值质控对TP、ALB、、AST、ALP结果与靶值比较

　　_从总蛋白结果来看RANBOX与Bio-Red 相差为6.45%，而宝灵曼与Bio-Red 较为接近；

　　_从白蛋白结果分析，宝灵曼与Bio-Red相对相差5.75%，与总蛋白结果明显不同。Bio-Red则与汽巴康宁比较接近。

　　_UREA结果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能与我们采用试剂盒的质量有关，所以试剂盒的线性范围理应成为选择试剂盒的重要依据之一。但从低值结果分析，也有5%的偏差（Bio-Red与Human）

　　_AST与ALT测定值均低于靶值，这就涉及我们选用什么K值问题。

　　_ALP测定中RANDOX（-16.6%）与宝灵曼（2.7%）靶值之间竟相差19.3%，这可能涉及试剂盒选用缓冲液种类，PH值以及所用ε值等有关。

　　通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我们决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。

　　六、 校准方法

　　例如日立(Hitachi)系列您必须购买宝灵曼(Boehringer)的试剂及其校准的说明书设置参数，用c.f.a.s.校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测定。此时得到的K值即为准确的校准K值，然后测定待测的10至20份新鲜血清三次取其平均值，应该说此结果是用Hitachi-Boehringer检测系统所获的测定值。然后用此血清值校准其它测定系统。

表 日立7170、BM试剂连续四个月每天进行校正(n=81)K值的变化

七、 关于酶活性测定校准问题

　　有的主张不进行校准而采用固定K值，有的作者以为应该进行校准。酶活力计算公式如下：

　　酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1) 令k=V×106/（ε×v；则酶活力（u/l）=△A/min×k

　　常用K值有以下几种：

　　a) 理论K值：根据理论摩尔消光系数（ε）来计算，如NADH为6.22×103

　　b) 实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测ε值来设定K值

　　c) 厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供6.3×103）

　　d) 校准K值：通过校准物直接校准得到的K值

　　在日立7170A全自动生化分析仪上，可以得到几种不同的酶K值，见下表 表 日立7170A全自动生化分析仪上用不同方法得到几种酶的K值

注：1校准物为宝灵曼c.f.a.s，试剂也用宝灵曼的配套试剂。
　　 2括号内数字是该K值与理论K值相比的变化率
　　 以上摘自张克坚文章中

　　_从上述K值中不难发现实测K值大于理论K值，这说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；

　　_校准K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；

　　_作者认为最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1必须使用配套的试剂；2必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性。

　　关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）均发表了人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。

　　八、 必须拟订校准计划（文件）

　　校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照“临床实验室质量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

1．建立校准方法

⑴选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；

⑵如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；

⑶确定校准的频度。至少每六个月进行一次校准；

⑷如有下列情况发生时，必须进行校准

　　_改变试剂的种类，或者批号更换了。如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；

　　_仪器或者检验系统进行一次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；

　　_质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；

2．每个实验室对每台仪器必需要有校准计划。 每次校准必须有详情的记录和分析。每次校准记录必须保存备查。

摘自《中国医疗器械工作站》