隐球菌肺病的抗原学检测评价
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作者：上海市肺科医院呼吸科二科 徐金富
隐球菌肺病在我国中部及南部较多见，其临床诊断比较困难。培养鉴定和组织病理学虽然是诊断肺隐球菌病的金标准，但是前者阳性率低，后者是又创性检查。相比而言，抗原学检测方法有较大的优势，目前临床上主要依靠抗原检测做内科诊断。隐球菌荚膜多糖抗原是主要的检测目标抗原，其检测方法具体有乳胶凝集法（LA），酶联免疫法(EIA)和侧向层析法(LFA)。这些方法各有优势，分述如下。
LA原理是以乳胶颗粒为载体，表面联结有抗新生隐球菌抗体，形成致敏乳胶悬液。通常在疾病进展期抗原滴度会升高，经积极治疗抗原滴度会下降，若持续阳性提示预后不佳。LA在过去的诊断共识中常常被推荐使用。国内外一些关于LA的研究显示其敏感性和特异性的高达93%-100% 。Dominic RS收集了200个可能有隐球菌感染的HIV阳性患者的脑脊液，用LA和真菌培养及鉴定与墨汁染色法分别检测隐球菌，发现LA比其他两种更敏感。但是LA方法还有一些不足：LA存在交叉反应现象，类风湿因子是其假阳性的主要原因。还有研究发现，毛孢子菌感染患者也可出现交叉反应。LA检测试剂因厂家不同会有差异，目前市售乳胶凝集反应试剂盒可以检测出10 ng /mL 的荚膜多糖抗原。Babady NE检测3种市售的乳胶凝集试剂发现在终点滴度上有很大差异。还有人认为LA需要花费人工，并且判断结果带有主观性，投入产出效率不高。
为了弥补LA检测隐球菌抗原的缺点，很多美国的实验室开始运用EIA。EIA的优点是可以实现自动化和客观的结果分析，并且不受类风湿因子的干扰。有一些研究用来比较EIA和LA。Saha DC收集127份脑脊液样本，分别用LA，EIA和直接培养来检测。结果是当培养是阳性时，LA和EIA均一致。当培养是阴性时，两种方法差别很大。76.3 % EIA and 70.8 % LA与培养一致。6.3% LA出现假阴性。所以在培养为阴性时，EIA在诊断隐球菌感染时更为重要。
2009年，Immy发明了一种新型的检测隐球菌抗原的方法---LFA用来诊断隐球菌感染。这种方法是运用能和四种主要血清型隐球菌抗原反应的单克隆抗体，提供定性和半定量的实验结果，反应时间只需10分钟。LFA和前两种方法相比有很多优点。LFA在室温下很稳定，反应时间快，对操作者的实验技能要求低，对实验室设备的要求不高。Boulware DR用LFA检测832例HIV感染者的脑脊液，并运用激光热力学原理进行对照，结果发现LFA敏感性99.3%, 特异性99.1%。 Tara Vijayan通过分析数据发现LFA的敏感性比LA或ELISA要高200倍。Hansen J运用LFA和EIA同时检测589例血清样本和411例脑脊液样本，发现两种方法的符合率为97.7% 。总之，LFA为资源缺乏地区提供了一种简单有效的诊断隐球菌感染的方法。
隐球菌抗原检测在临床上得到了广泛应用。有研究表明：肺部隐球菌感染（PD）与隐球菌肺部外加肺外感染（又称播散性感染，DD）的抗原检测存在较大差异。Baddley JW回顾性研究了 1990到2000年15个中心的所有HIV阴性的患有隐球菌肺病的临床资料，发现血清隐球菌抗原滴度 ≥1:64在DD中比PD更常见（17% vs 22%; p=0.0001）。血清隐球菌抗原阴性在PD中比DD中更常见（48% VS 8%; P=0.0005），提示局限性肺疾病的患者血清中较难检测到隐球菌抗原，如果血清中抗原滴度上升则提示该患者有肺外播散的可能。必须注意的是隐球菌抗原检测也可能是阴性，曾有个例报道称在3名播散性肺隐球菌病患者血清中没有检测到隐球菌抗原。隐球菌病诊疗指南指出对于免疫功能低下的肺隐球菌病患者，通常会发生肺外播散，因此在该类患者中均推荐做腰椎穿刺检查以及血清抗原监测。在隐球菌流行地区常规检测血清抗原可以早期诊断隐球菌肺病，并且提供早期治疗窗。
隐球菌抗原检测是一种简单有效，创伤小，敏感度和特异度较高的诊断肺隐球菌病的手段。抗原检测在隐球菌肺病的早期诊断，病情监测和预后判断中起到重要作用。
