【讨论】 抗体工程技术讨论

抗体工程：

抗体研究领域的进展大致可分为3个阶段：
（1）以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
（2）以1975年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表。
（3）以1994年Winter以基因工程方法制备抗体为代表。这是抗体研究领域出现的又一次技术革命，它不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发酵或转基因动物、植物大规模生产抗体。在此基础上发展成抗体工程。

　　Winter等人在1994年创建了噬菌体抗体库技术，克服了人体不能随意免疫的缺点，用人的外周血制备抗体文库，从而获得人源性基因工程抗体。而且将抗体基因的克隆和表达融为一体，同在一种载体上进行，将抗体基因表达在载体的表面，用固相化抗原对表达产物的载体进行淘筛（panning），在数日内就可筛选出阳性克隆，从而能构建出大库容文库囊括天然全套抗体基因，人们完全可以用基因工程方法研制任何一种具有高度特异性的抗体，使抗体工程的设想成为现实。
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新型抗体的制备技术

一、对鼠源性抗体的改造
1.人-鼠嵌合抗体：鼠源性单抗的V区，人Ig的C区。
2.人源化抗体：将鼠抗体的互补决定区(CDR)与人IgFR和C连接构建“人源化抗体”。
(1) 模板替换
(2) 表面重塑
(3) 补偿变换
(4) 定位保留
3.小分子抗体：
(1) ScFv：由VH和VL中间连以14－15个小肽, 常用的连接肽为(Gly4Ser)3。；
(2) VH与VL适当部位各引入一个半胱氨酸形成以二硫键固定的Fv段而构成的DsFv；
(3) 将ScFv中两个可变区之间的接头缩短,使两分子间VH和VL配对形成双价小分子抗体(Diabody)；
(4) 将两种不同特异性的V基因交叉配对, 则可得到双特异性Diabody；
(5) 在ScFv的一端加上一个双聚化结构亦可构建不同类型的双价或双特异性小分子抗体, 如Minibody等。
二、抗体库技术
噬菌体抗体库技术是用PCR扩增出抗体的全套可变区基因，通过噬菌体呈现技术，将Fab段或ScFv表达在噬菌体表面，经过“吸附－洗脱－扩增”过程筛选并富集特异性抗体。

三、细胞内抗体

四、基因工程抗体衍生技术
1. 双特异性抗体(BsAb)或称双功能抗体(BfA)
2. 抗体的抗原化技术
3. 抗体重组免疫毒素
4. 催化抗体(catalytic antibody)或抗体酶(abzyme)
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抗体研究领域的诺贝尔奖获得者
1902 Behring Germany 发现抗毒素，血清疗法的创始人
1908 Ehrlich Germany 抗体生成侧链学说
1972 Edelman USA 阐明抗体化学结构
Portor UK
1984 Jerne Denmark 免疫网络调节学说
Kohler Germany 细胞融合技术
Milstein UK 制备单克隆抗体
1987 Tonegawa Japan 抗体多样性遗传基础
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欢迎此方面的同行一起讨论。