【建议】关于如何提蛋白质纯化问题（附例）

在得不到足够信息的情况下，往往比较难以分析，大家多是在假定一些信息来回答问题，这样有时候碰巧符合了，但也有推断错误的时候。这样对解决问题是不利的。
如果不涉及到技术保密问题，关于蛋白质纯化问题都建议按下列信息来提问。

1、建议贴张SDS-PAGE图来分析一下，最好包括：
Marker，胶浓度，变性还是非变性
诱导前
诱导后
破菌上清
破菌沉淀
沉淀洗涤上清
变性溶解上清
变性溶解沉淀
柱纯化前
柱纯化穿透
柱洗脱
等各个样品。
标上marker大小，电泳条带说明，从左到右，或1234567.....

2、建议把流程中的各个部分所用缓冲液说明一下，例如：
破菌缓冲液:如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl
破菌方法：如超声，4s工作，4s间隙，冰水浴，共200次
包涵体洗涤液：如PBS（pH7.4，20mM PB，0.15N NaCl）
包涵体溶解液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素
柱平衡液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，20mM 咪唑
柱淋洗液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，40mM 咪唑
柱洗脱液：如pH8.0，20mMTris，0.5N NaCl，8M尿素，200mM 咪唑
柱洗脱方法：如分段洗脱，线性梯度洗脱等

3、建议说明纯化规模和纯化设备，例如：
一次纯化所用的菌体量：如10g湿菌体或500ml摇瓶发酵菌等
破菌缓冲液体积：如150ml
包涵体洗涤，溶解液体积：包涵体洗涤液每次150ml，共洗涤3次；包涵体用50ml包涵体溶解液溶解，搅拌过夜
纯化用柱类型：如XK26/20、或自制、或国产16/20、或预装柱等
纯化用柱大小：如40ml
柱淋洗液用量：如200ml
柱洗脱液用量：如150ml
纯化仪器：如国产、AKTA Explorer 100、Duoflow

4、建议适当说明目标蛋白的性质，例如：
载体类型：PET32a
Tag类型：融合硫氧还蛋白，histag6
理论分子量：如融合蛋白共35kd，目标蛋白17kd（不含硫氧还蛋白）
理论等电点：如融合蛋白pI7.0，目标蛋白pI8.5等

另外，建议大家先搜索本版，很多问题的答案早就有了！
想学习蛋白质纯化的战友，请看看本版的精华区，那儿可是个宝库。