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1925
我最近在网上看到有公司在ELISA试剂盒的促销,好划算啊
我想把这个好消息,好资源与大家分享
几年来，博士德的ELISA试剂盒以优良的品质、卓越的性价比和良好的售后服务受到广大科研工作者的青睐。更因其品种齐全、操作简单、检测时间短、所需样品少而成为细胞因子检测的经典产品。公司生产的近270多种 ELISA 试剂盒，涉及分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等生命科学研究的各个领域。公司总部位于武汉，代理商经销商遍及全国各地，形成了覆盖全国的有效服务网络，训练有素的专业人员能为客户提供技术指导和满意的售后服务。为了不断开发研制新产品，我们建立的生产基地，拥有1500平方米的高标准实验室和500平方米的研发中心,我们所做的一切都是为了使您的工作更轻松、更快捷。您的肯定，是我们继续发展的动力。
一． ELISA原理：
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。根 据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。现在主要介绍双抗体夹心法：
双抗体夹心法：（ELISA基本原理和操作过程示意图）
博士德经过不断的探索，开发了ABC-双抗体夹心ELISA法（原理和操作过程示意图如下）进一步提高了敏感性
①：固相支持物 ②：特异性包被抗体 ③：样品 ④：生物素化抗体 ⑤：辣根过氧化物酶HRP-酶标链亲和素 ⑥：TMB显色液 ⑦：显色
在ELISA实验前的注意事项
1.仔细阅读说明书
2.确定试剂盒在有效期内
3.按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
4.标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法
实验者，注意低温保存
5.准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等
6.根据检测标本数量确定所需试剂的量
7.按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂
8.若有问题，应与我公司或代理商的技术支持联系
博士德生产的ELISA试剂盒特点:
可靠性：博士德公司提供一系列细胞因子和其它蛋白质类ELISA试剂盒。这些试剂盒的标准品、检测抗体和显色剂等辅助试剂/耗材全部为进口产品。其中标准品主要来自SIGMA, R&D和PIERCE公司，保证了定量分析的准确性。检测抗体均已做过特异性和交叉反应的详细研究。高度优化的ELISA检测试剂盒可以在检测标本时将干扰因素和非特异反应减少到最低水准，博士德生产的ELISA试剂盒是通过充分验证的，
敏感性：博士德的ELISA试剂盒使用标准的双抗体夹心技术，并且引进亲和素—生物素—过氧化物酶系统，以进一步提高敏感性。
稳定性：一般ELISA试剂盒所用的包被方法，很容易因干燥导致包被的抗体失去活性，从而影响结果的准确性。为此博士德进行了长期的研究，以期找到一种包被后抗体长期不失活的方法，甚至是在室温。博士德自主开发的新包被方法，正是采用了这一技术。博士德的ELISA试剂盒特别稳定。频繁使用时,在2-8℃可保存6个月；较长时间不用时，-20℃保存期长达12个月。
适用性：ELISA试剂盒适于细胞培养液、体液、血清、血浆和组织匀浆等标本（具体每个试剂盒略有不同）。广泛的检测范围可以满足大多数检测要求，必要时该范围可以根据用户的需求做调整。
保存： 购入ELISA试剂盒后，如果不打算短期内使用，可以将试剂盒冷冻保存（-20℃）。如果试剂盒用去部分后，余下的部分如果短期内不使用，仍可以冷冻保存。试剂盒中的关键试剂都加有防冻成份，但应避免频繁的冻融。试剂盒要反复使用时，于4℃冷藏保存。总的来说，博士德提供ELISA试剂盒保质期为售出之日起4个月。
表中为：博士德ELISA试剂盒技术参数（以人IL-2为例）
需要标本量 100ul
灵敏度 ＜1pg/ml
检测范围 15.6pg/ml→1000pg/ml
特异性 系统和其它细胞因子无交叉反应
用途 用于体外定量分析人血清、体液、组织匀浆或细胞培养上清
每个试剂盒包括以下组份（以人IL-2为例）
Human IL-2 ELISA（产品编号:EK0397）
96孔板：包被抗IL-2单抗
Biotin标记的抗IL-2多抗130μl，效价1：100。
IL-2标准品：冻干的重组IL-2 10ng/管，总2管
样品稀释液30ml
抗体稀释液，12ml
ABC稀释液，12ml
亲和素-过氧化物酶复合物（ABC），130μl，效价1：100
TMB显色剂10ml
TMB终止液，10ml
试剂盒贮存条件和有效期：
参照说明书保存试剂盒和其中的组份。
未开封试剂盒：贮存在2-8℃，不要使用过期的试剂盒
标准品：分装并贮存在-20℃以下，可达1个月。应避免反复冻融
微孔板：将未使用的板条用箔纸包好，加上干燥剂沿四周封口。在2-8℃可以4个月左右
博士德ELISA试剂盒一般操作流程：(以人的IL-2(产品编号:EK0397)为例）
已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。。试剂或样品稀释时，切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数。
1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目，并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9；做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。
2． 将1000pg/ml ，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于人血清、血浆、体液、组织匀浆或细胞培养上清，直接加已用样品稀释液稀释的样品100μι。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。不洗。
5． 将准备好的生物素抗人IL-2抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。（TMB空白显色孔除外）。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入（TMB空白显色孔除外）。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔90μι依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应8-12分钟（注意：显色时间供参考，因用户实验室条件差异，最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显）。
10． 按每孔0.1ml依次加入TMB终止液，此时蓝色立转黄色。
11． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。显色的程度通过ELISA酶标检测仪测定光密度（OD：optical density）记录。通过细胞因子的标准蛋白做已知浓度系列稀释，测出OD值后绘制出标准曲线，根据标准曲线可推算出标本中细胞因子的含量，一般使用计算机软件可以很快得到结果（博士德网站有下载）
有两种设定空白对照的方案：
（1）将TMB空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲线，以吸光值作为纵坐标，以浓度作为横坐标。
（2）将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
12． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
ELISA常见技术指南
1. 选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体。
2. ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体和检测抗体在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的细胞因子标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
3.标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用标准品前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的标准品。根据每批说明书中的细节，将冻干的标准品复溶。以人的IL-2(产品编号:EK0397)为例
IL-2 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。
试剂盒提供2管标准品，每管10ng，每次使用1管。
1） 配制10,000pg/ml标准品：取1ml样品稀释液加入标准品管内，盖好后静置10分钟以上， 然
后反复颠倒/搓动以助溶解。
2） 配制1000pg/ml标准品：取0.1ml 10,000pg/ml的标准品加入有0.9ml样品稀释液的Eppendorf
管中，混匀，做上标记。
配制500pg/ml→15.6pg/ml标准品：准备6只Eppendorf管，每管加0.3ml样品稀释液，分别标记上500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml。取0.3ml 1000pg/ml的标准品加入标记500pg/ml的管中，混匀后同样取出0.3ml , 加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管
4. 当测定混合液体中的细胞因子时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的IgG.
5.加样：手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)。加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。每一步加样要迅速，力度适中，不可触及标板的孔壁和孔底。加样后及时放入孵箱。加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
附1：ELISA辅助试剂和器材：
AR1100 96孔可拆式酶标板（高吸附） 50元/块
AR1103 ELISA用ABC 140元/瓶（130μι）
AR1104 Tetramethylbenzidine(TMB) 80元/瓶（10ml）
AR1105 终止液（0.5M H2SO4） 30元/瓶（10ml）
AR1106 样品稀释液 40元/瓶（30ml）
AR1107 ELISA用生物素化抗体 380/瓶（130μι）
好消息！！！ 在7月9日到9月10日期间进行暑假期间让利优惠活动，所有ELISA试剂盒7折上市促销。博士德部分现货ELISA产品超低价促销! 供应以上产品均为现货。特价产品如下：
h.Activin A 1000元/96T h.MIP-1a 1500元/96T m.IL-4 1000元/96T
h.BDNF 1000元/96Th.MIP-3a 1500元/96T m.IL-5 1000元/96T
h.BMP-2 1500元/96Th.MCP-1 1000元/96T m.IL-6 1000元/96T
h.CD54 1500元/96Th.MMP-1 1500元/96T m.IL-10 1000元/96T
h.CNTF 1500元/96Th.MMP-2 1500元/96T m.IL-11 1500元/96T
h.Eotaxin 1500元/96Th.MMP-3 1500元/96T m.IL-12(P70) 1500元/96T
h.EPO 1500元/96Th.MMP-7 1500元/96T m.IL-13 1000元/96T
h.E-Selectin1000元/96Th.MMP-8 1500元/96T m.Leptin 1000元/96T
h.FAS 1000元/96Th.NGFb 1000元/96T m.LN 1000元/96T
h.FAS-L 1000元/96Th.NT-3 1000元/96T m.MMP-2 1500元/96T
h.FGF1 1500元/96Th.NT-4 1000元/96T m.NGFb 1000元/96T
h.Flt-3 1500元/96Th.OPG 1500元/96T m.NT-3 1000元/96T
h.FN 1000元/96Th.OPN 1500元/96T m.NT-4 1000元/96T
h.Fractalkine1500元/96Th.PDGF-AB1000元/96T m.OPG 1500元/96T
h.HGF 500元/96Th.PDGFsRa1500元/96T m.P-Selectin 1000元/96T
h.IFNr 1000元/96Th.P-Selectin1000元/96T m.TGFb1 1000元/96T
h.IGF-1 1000元/96Th.Rantes 1500元/96T m.TIMP-1 1500元/96T
h.IGF-2 1000元/96Th.TGFb1 1000元/96T m.TNFa 1000元/96T
h.IGFBP-1 1500元/96Th.Tie-2 1500元/96T m.VEGF 1000元/96T
h.IGFBP-3 1500元/96Th.TIMP-1 1500元/96T R.BDNF 1000元/96T
h.IL-1a 1000元/96Th.TIMP-2 1500元/96T R.BMP-2 1500元/96T
h.IL-1b 1000元/96Th.TNFa 1000元/96T R.CD54 1500元/96T
h.IL-2 1000元/96Th.TNFb 1000元/96T R.FN 1000元/96T
h.IL-2Rb 1500元/96Th.TNF-SRI 1500元/96T R.GDNF 1500元/96T
h.IL-4 1000元/96Th.VEGF 1000元/96T R.GM-CSF 1500元/96T
h.IL-5 1000元/96Th.TNFR1 1500元/96T R.IGF-1 1000元/96T
h.IL-6 1000元/96Th.TNFR2 1500元/96T R.IL-1b 1000元/96T
h.IL-10 1000元/96Tm.BDNF 1000元/96T R.IL-4 1500元/96T
h.IL-12p40 1500元/96Tm.BMP-2 1500元/96T R.IL-10 1000元/96T
h.IL-12p70 1000元/96Tm.CD54 1500元/96T R.LN 1000元/96T
h.IL-13 1000元/96Tm.E-Selectin1500元/96T R.NGFb 1000元/96T
h.IL-15 1000元/96Tm.ICAM-1 1500元/96T R.NT-3 1000元/96T
h.IL-17 1000元/96Tm.IGF-1 1000元/96T R.NT-4 1000元/96T
h.Leptin 1000元/96Tm.IL-1a 1500元/96T R.TGFb1 1000元/96T
h.LeptinR 1500元/96Tm.IL-1b 1000元/96T R.TIMP-1 1500元/96T
h.LIF 1500元/96Tm.IL-2 1000元/96T R.TNFa 1000元/96T
h.LN 1000元/96Tm.IL-3 1500元/96T R.VEGF 1000元/96T
我想把这个好消息,好资源与大家分享
几年来，博士德的ELISA试剂盒以优良的品质、卓越的性价比和良好的售后服务受到广大科研工作者的青睐。更因其品种齐全、操作简单、检测时间短、所需样品少而成为细胞因子检测的经典产品。公司生产的近270多种 ELISA 试剂盒，涉及分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等生命科学研究的各个领域。公司总部位于武汉，代理商经销商遍及全国各地，形成了覆盖全国的有效服务网络，训练有素的专业人员能为客户提供技术指导和满意的售后服务。为了不断开发研制新产品，我们建立的生产基地，拥有1500平方米的高标准实验室和500平方米的研发中心,我们所做的一切都是为了使您的工作更轻松、更快捷。您的肯定，是我们继续发展的动力。
一． ELISA原理：
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。根 据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。现在主要介绍双抗体夹心法：
双抗体夹心法：（ELISA基本原理和操作过程示意图）
博士德经过不断的探索，开发了ABC-双抗体夹心ELISA法（原理和操作过程示意图如下）进一步提高了敏感性
①：固相支持物 ②：特异性包被抗体 ③：样品 ④：生物素化抗体 ⑤：辣根过氧化物酶HRP-酶标链亲和素 ⑥：TMB显色液 ⑦：显色
在ELISA实验前的注意事项
1.仔细阅读说明书
2.确定试剂盒在有效期内
3.按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
4.标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法
实验者，注意低温保存
5.准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等
6.根据检测标本数量确定所需试剂的量
7.按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂
8.若有问题，应与我公司或代理商的技术支持联系
博士德生产的ELISA试剂盒特点:
可靠性：博士德公司提供一系列细胞因子和其它蛋白质类ELISA试剂盒。这些试剂盒的标准品、检测抗体和显色剂等辅助试剂/耗材全部为进口产品。其中标准品主要来自SIGMA, R&D和PIERCE公司，保证了定量分析的准确性。检测抗体均已做过特异性和交叉反应的详细研究。高度优化的ELISA检测试剂盒可以在检测标本时将干扰因素和非特异反应减少到最低水准，博士德生产的ELISA试剂盒是通过充分验证的，
敏感性：博士德的ELISA试剂盒使用标准的双抗体夹心技术，并且引进亲和素—生物素—过氧化物酶系统，以进一步提高敏感性。
稳定性：一般ELISA试剂盒所用的包被方法，很容易因干燥导致包被的抗体失去活性，从而影响结果的准确性。为此博士德进行了长期的研究，以期找到一种包被后抗体长期不失活的方法，甚至是在室温。博士德自主开发的新包被方法，正是采用了这一技术。博士德的ELISA试剂盒特别稳定。频繁使用时,在2-8℃可保存6个月；较长时间不用时，-20℃保存期长达12个月。
适用性：ELISA试剂盒适于细胞培养液、体液、血清、血浆和组织匀浆等标本（具体每个试剂盒略有不同）。广泛的检测范围可以满足大多数检测要求，必要时该范围可以根据用户的需求做调整。
保存： 购入ELISA试剂盒后，如果不打算短期内使用，可以将试剂盒冷冻保存（-20℃）。如果试剂盒用去部分后，余下的部分如果短期内不使用，仍可以冷冻保存。试剂盒中的关键试剂都加有防冻成份，但应避免频繁的冻融。试剂盒要反复使用时，于4℃冷藏保存。总的来说，博士德提供ELISA试剂盒保质期为售出之日起4个月。
表中为：博士德ELISA试剂盒技术参数（以人IL-2为例）
需要标本量 100ul
灵敏度 ＜1pg/ml
检测范围 15.6pg/ml→1000pg/ml
特异性 系统和其它细胞因子无交叉反应
用途 用于体外定量分析人血清、体液、组织匀浆或细胞培养上清
每个试剂盒包括以下组份（以人IL-2为例）
Human IL-2 ELISA（产品编号:EK0397）
96孔板：包被抗IL-2单抗
Biotin标记的抗IL-2多抗130μl，效价1：100。
IL-2标准品：冻干的重组IL-2 10ng/管，总2管
样品稀释液30ml
抗体稀释液，12ml
ABC稀释液，12ml
亲和素-过氧化物酶复合物（ABC），130μl，效价1：100
TMB显色剂10ml
TMB终止液，10ml
试剂盒贮存条件和有效期：
参照说明书保存试剂盒和其中的组份。
未开封试剂盒：贮存在2-8℃，不要使用过期的试剂盒
标准品：分装并贮存在-20℃以下，可达1个月。应避免反复冻融
微孔板：将未使用的板条用箔纸包好，加上干燥剂沿四周封口。在2-8℃可以4个月左右
博士德ELISA试剂盒一般操作流程：(以人的IL-2(产品编号:EK0397)为例）
已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。。试剂或样品稀释时，切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数。
1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目，并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9；做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。
2． 将1000pg/ml ，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于人血清、血浆、体液、组织匀浆或细胞培养上清，直接加已用样品稀释液稀释的样品100μι。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。不洗。
5． 将准备好的生物素抗人IL-2抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。（TMB空白显色孔除外）。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入（TMB空白显色孔除外）。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔90μι依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应8-12分钟（注意：显色时间供参考，因用户实验室条件差异，最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显）。
10． 按每孔0.1ml依次加入TMB终止液，此时蓝色立转黄色。
11． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。显色的程度通过ELISA酶标检测仪测定光密度（OD：optical density）记录。通过细胞因子的标准蛋白做已知浓度系列稀释，测出OD值后绘制出标准曲线，根据标准曲线可推算出标本中细胞因子的含量，一般使用计算机软件可以很快得到结果（博士德网站有下载）
有两种设定空白对照的方案：
（1）将TMB空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲线，以吸光值作为纵坐标，以浓度作为横坐标。
（2）将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
12． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
ELISA常见技术指南
1. 选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体。
2. ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体和检测抗体在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的细胞因子标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
3.标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用标准品前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的标准品。根据每批说明书中的细节，将冻干的标准品复溶。以人的IL-2(产品编号:EK0397)为例
IL-2 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。
试剂盒提供2管标准品，每管10ng，每次使用1管。
1） 配制10,000pg/ml标准品：取1ml样品稀释液加入标准品管内，盖好后静置10分钟以上， 然
后反复颠倒/搓动以助溶解。
2） 配制1000pg/ml标准品：取0.1ml 10,000pg/ml的标准品加入有0.9ml样品稀释液的Eppendorf
管中，混匀，做上标记。
配制500pg/ml→15.6pg/ml标准品：准备6只Eppendorf管，每管加0.3ml样品稀释液，分别标记上500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml。取0.3ml 1000pg/ml的标准品加入标记500pg/ml的管中，混匀后同样取出0.3ml , 加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管
4. 当测定混合液体中的细胞因子时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的IgG.
5.加样：手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)。加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。每一步加样要迅速，力度适中，不可触及标板的孔壁和孔底。加样后及时放入孵箱。加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
附1：ELISA辅助试剂和器材：
AR1100 96孔可拆式酶标板（高吸附） 50元/块
AR1103 ELISA用ABC 140元/瓶（130μι）
AR1104 Tetramethylbenzidine(TMB) 80元/瓶（10ml）
AR1105 终止液（0.5M H2SO4） 30元/瓶（10ml）
AR1106 样品稀释液 40元/瓶（30ml）
AR1107 ELISA用生物素化抗体 380/瓶（130μι）
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