【原创】 氨基酸态氮的测定
丁香园
5300
关键词：标准物质 食品成分检测 化学试剂 分析试剂
一、双指示剂甲醛滴定法
1．原理
氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基，并用间接的方法测定氨基酸总量。
2。试剂
①40％中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40％甲醛中和至淡蓝色。
②0．1％百里酚酞乙醇溶液。
③0．1％中性红50％乙醇溶液。
④O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。
3．操作步骤
移取含氨基酸约20～30 mg的样品溶液2份，分别置于250 mL锥形瓶中，各加50 mL蒸馏水，其中1份加人3滴中性红指示剂，用O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL，摇匀，静置1 min，用O．1mol·L-1，氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。
4．计算
氨基酸态氮(％)= [undefined( V2-V1~undefined0.014/m~undefined100
式中：c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol·L-1；
V1——用中性红作指示剂滴定时消耗<font>氢氧化钠</font>标准溶液体积，mL；
V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL；
m一测定用样品溶液相当于样品的质量，g；
0.014——氮的毫摩尔质量，g·(mmol) -1。
5. 说明
①此法适用于测定食品中的游离氨基酸。
②固体样品应先进行粉碎，准确称样后用水萃取，然后测定萃取液；液体试样如酱油、饮料等可直接吸取试样进行测定。萃取可在50℃水浴中进行30 min。
③若样品颜色较深，可加适量活性炭脱色后再测定。
二、酸度滴定法
本法适用于以粮和豆饼、麸皮为原料发酵生产的酱和酱油的测定。
1．原理
根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性。用氢氧化钠标准溶液滴定，以酸度计定终点。 —COOH被完全中和时，pH值约为8．5～9．5。本法准确快速，可用于各类样品游离氨基酸含量测定。
2．仪器
①酸度计。
②磁力搅拌器。
③微量滴定管(10 mL)。
3．试剂
①36％甲醛溶液。
②O．05mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。
4．操作步骤
① 确吸取5．O mL液体样品，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。
②吸取20．0 mL上述样品稀释液于200 mL烧杯中，加水60 mL，开动磁力搅拌器，用O．05 mol·L-1NaOH标准溶液滴定至酸度计指示为pH=8．2(记下消耗氢氧化钠溶液的体积，可用于计算总酸含量)。
③加入10．O mL甲醛溶液，混匀。再用0．05 mol·L-1叫NaOH标准溶液继续滴定至pH=9．2，记录消耗标准溶液的体积(V1)。
取80 mL水，在同样条件下做试剂空白试验，记录消耗标准溶液的体积(V0)。
5．计算
X= [undefined( V1-V0~undefined0.014/undefined（V/100）]100~Kbr_~H~M~Kbr_~H~M______式中：X——样品中氨基酸态氮的质量分数，％；
V1——样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点(pH=9．2)所消耗氢氧化钠标准溶液的体积；
V0——空白试验加入甲醛后滴定至终点所消耗氢氧化钠标准溶液的体积；
V——滴定时吸取样品稀释液体积，mL；
c——氢氧化钠标准溶液浓度，mol·L-1。
5——测定用液体样品毫升数。
6．说明
①加入甲醛后应立即滴定，不宜放置时间过长，以免甲醛聚合，影响测定结果。
②样品中若含有铵盐，由于铵离子也能与甲醛作用，将使测定结果偏高。
③对于浑浊和色深样液可不必经处理而直接测定。
一、双指示剂甲醛滴定法
1．原理
氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基，并用间接的方法测定氨基酸总量。
2。试剂
①40％中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40％甲醛中和至淡蓝色。
②0．1％百里酚酞乙醇溶液。
③0．1％中性红50％乙醇溶液。
④O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。
3．操作步骤
移取含氨基酸约20～30 mg的样品溶液2份，分别置于250 mL锥形瓶中，各加50 mL蒸馏水，其中1份加人3滴中性红指示剂，用O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL，摇匀，静置1 min，用O．1mol·L-1，氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。
4．计算
氨基酸态氮(％)= [undefined( V2-V1~undefined0.014/m~undefined100
式中：c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol·L-1；
V1——用中性红作指示剂滴定时消耗<font>氢氧化钠</font>标准溶液体积，mL；
V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL；
m一测定用样品溶液相当于样品的质量，g；
0.014——氮的毫摩尔质量，g·(mmol) -1。
5. 说明
①此法适用于测定食品中的游离氨基酸。
②固体样品应先进行粉碎，准确称样后用水萃取，然后测定萃取液；液体试样如酱油、饮料等可直接吸取试样进行测定。萃取可在50℃水浴中进行30 min。
③若样品颜色较深，可加适量活性炭脱色后再测定。
二、酸度滴定法
本法适用于以粮和豆饼、麸皮为原料发酵生产的酱和酱油的测定。
1．原理
根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性。用氢氧化钠标准溶液滴定，以酸度计定终点。 —COOH被完全中和时，pH值约为8．5～9．5。本法准确快速，可用于各类样品游离氨基酸含量测定。
2．仪器
①酸度计。
②磁力搅拌器。
③微量滴定管(10 mL)。
3．试剂
①36％甲醛溶液。
②O．05mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。
4．操作步骤
① 确吸取5．O mL液体样品，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。
②吸取20．0 mL上述样品稀释液于200 mL烧杯中，加水60 mL，开动磁力搅拌器，用O．05 mol·L-1NaOH标准溶液滴定至酸度计指示为pH=8．2(记下消耗氢氧化钠溶液的体积，可用于计算总酸含量)。
③加入10．O mL甲醛溶液，混匀。再用0．05 mol·L-1叫NaOH标准溶液继续滴定至pH=9．2，记录消耗标准溶液的体积(V1)。
取80 mL水，在同样条件下做试剂空白试验，记录消耗标准溶液的体积(V0)。
5．计算
X= [undefined( V1-V0~undefined0.014/undefined（V/100）]100~Kbr_~H~M~Kbr_~H~M______式中：X——样品中氨基酸态氮的质量分数，％；
V1——样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点(pH=9．2)所消耗氢氧化钠标准溶液的体积；
V0——空白试验加入甲醛后滴定至终点所消耗氢氧化钠标准溶液的体积；
V——滴定时吸取样品稀释液体积，mL；
c——氢氧化钠标准溶液浓度，mol·L-1。
5——测定用液体样品毫升数。
6．说明
①加入甲醛后应立即滴定，不宜放置时间过长，以免甲醛聚合，影响测定结果。
②样品中若含有铵盐，由于铵离子也能与甲醛作用，将使测定结果偏高。
③对于浑浊和色深样液可不必经处理而直接测定。
