【求助】关于阴道鳞状细胞原代培养

各位老师好，最近在做阴道壁鳞状细胞的原代培养，一直不见起色，培养不成功，情况就是没有任何细胞长出来，特来请教大家。

看了好多文献，看了很多细胞培养的资料，咨询过很多同学，然后做了多次，都是没有细胞，呵呵

现在有这么几个问题：

1：培养基的选择：
文献中都说用的是K-SFM培养基，我现在是用了K-SFM培养基和DMEM/F12两种培养基同时做，希望对比一下两种培养基的情况。
结果都是没长出来，DMEM/F12时，24小时候，培养瓶中会出现一种很细小的像细菌一样的小东西，但是培养液一直是清亮的，这些小东西经过染色不着色，而且随着时间延长而大量增多，有的一直漂在液中，有的会贴服培养瓶底部，冲洗不掉，不知道是什么东西？

2：关于组织剪碎：
由于我取的是阴道残端的一小块组织，但是肉眼没法仅将上皮层取下，故直接完全剪碎，直接铺板。
可有人说应该剪得块大些，用镊子夹着组织块，让上皮层的面朝向培养瓶的底部，这个确实很难做到，因为组织本来就很小，稍做剪碎，我就分不清面了。。。
还有人说直接剪得碎一些，直接铺板，理论上应该有一半的上皮层会朝向底部。。。。
目前我采用的是第二种，不知是否不妥？

3：关于培养瓶中的培养液：
我一般加极少量培养液，4-6小时再加2ml培养液（75ml培养瓶），然后应该什么时候换液呢？
最近我一般是每24小时换一次，换的时候发现就会把本已贴到瓶底的组织快给冲走，很是郁闷

另外，当培养瓶放入培养箱后，在5%二氧化碳环境下，培养液的颜色应该是什么样的呢？
应该是清亮且微黄的吗？
我觉得我的培养液每次从培养箱中拿出来，都是微黄的，不知道这个是否正常？

谢谢各位老师给于指点！

做过小鼠的神经原代和上皮细胞的原代培养，我好奇的是，怎么没有消化这一步呢？？毕竟是组织啊，直接剪碎能得到多少游离的单细胞啊？当然，最可靠的还是查文献，看看人家的protocol是怎样描述的，应该不是太难的

原代培养有两种：一种是你说的酶消化法，另一个是组织爬片法，当然不用酶了，呵呵

现在还有在养阴道上皮细胞吗？用K-sfm培养基可以养出来，我的问题是每次取标本都会污染，不知道你有没有这方面问题，怎么对标本消毒