【求助】蛋白提取

目前在提取蛋白时出现了些问题，希望能得到大家的帮助。
我用的是ripa裂解液，加了蛋白酶抑制剂，将贴壁细胞刮下来，冰上继续裂解，期间vortex几次，最后12,000gx10min ;此时分别取上清和沉淀加入loading buffer煮沸5min，上样做WB。发现上清和沉淀中均有目的条带。现想咨询：离心后的沉淀是什么成分？（细胞核？碎片？还是不溶性蛋白）；如果是不溶性的蛋白加了loading buffer煮沸就可以电泳做WB了吗？如果我想检测全细胞的蛋白，不分可溶性和不溶性，应该怎么做呢？

RIPA裂解液也分强、中、弱的，要看看你的目的蛋白是否为难溶性蛋白，如果为难溶，你的沉淀中有目的蛋白也正常了。暂时没听说不溶性蛋白可以做WB的。个人认为你要求的全细胞蛋白的问题，你可以考虑用二维电泳用的蛋白裂解液，其裂解效率非常高，不溶性沉淀非常少 。另提醒下，RIPA法裂解的蛋白提取物，不能用Bradford法测定蛋白浓度的

可以考虑用二维电泳用的蛋白裂解液，其裂解效率非常高，不溶性沉淀非常少

例如 产品编号为 PL040 PL041 PL042等三种

可以考虑用二维电泳用的蛋白裂解液，其裂解效率非常高，不溶性沉淀非常少

例如 产品编号为 PL040 PL041 PL042等三种